實驗概要
本實驗介紹了綿羊紅細胞(SRBC)誘導小鼠DTH(足跖增厚法)的原理及方法。
實驗原理
SRBC可刺激T淋巴細胞增殖成致敏淋巴細胞,4天后,當再以SRBC攻擊時,即可見攻擊部位出現遲發型變態反應。
主要設備
1. 游標卡尺(精密度0.02mm)
2. 微量注射器(50μL)
實驗材料
綿羊紅細胞(SRBC)
實驗步驟
1. 致敏
小鼠用2%(v/v)SRBC腹腔或靜脈免疫,每只鼠注射0.2mL(約1×108個SRBC)。
2. DTH的產生與測定
免疫后4天,測量左后足跖部厚度,然后在測量部位皮下注射20%(v/v)SRBC,每只鼠20μL(約1×108個 SRBC),注射后于24h測量左后足跖部厚度,同一部位測量三次,取平均值。
3. 數據處理和結果判定
一般采用方差分析,但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗,方差齊,計算F值,F值< F0.05,結論:各組均數間差異無顯著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計;對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換,待滿足正態或方差齊要求后,用轉換后的數據進行統計;若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的,改用秩和檢驗進行統計。
以攻擊前后足跖厚度的差值來表示DTH 的程度。受試樣品組的差值顯著高于對照組的差值,可判定該項實驗結果陽性。
注意事項
1. 測量足跖厚度時,最好由專人來進行。卡尺緊貼足跖部,但不要加壓,否則會影響測量結果。
2. 攻擊時所用的SRBC要新鮮(保存期不超過1周)。