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  • 發布時間:2020-09-01 12:38 原文鏈接: 雙向電泳(twodimensionalelectrophoresis)操作步驟及相關溶液

    實驗相關試劑配制

    1.Bradford 工作液

    95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考馬斯亮蘭G250,溶解完后再加磷

    85%磷酸 52ml 酸,最后超純水定容至500ml.過濾后置于棕色瓶

    考馬斯亮蘭G250 0.035g 外加油皮紙保存(Bradford不穩定,一周內有效)

    2.裂解液

    尿素 8M

    硫脲 2M

    CHAPS 4%

    DTT 60 mM

    Tris-base 40 mM(如果有條件可以添加PMSF 0.5mM和5%的Pharmalate)

    3. 水化液儲液

    尿素 8M

    硫脲 2M

    CHAPS 4%

    Tris-base 40 mM

    4. 分離膠buffer (pH8.8)250ml

    SDS 0.4% 1g

    Tris-HCl 1.5M 45.4275g

    5. 濃縮膠buffer (pH6.8)100ml
    SDS 0.4% 0.4g

    Tris-HCl 0.5M 6.07g

    6.凝膠儲存液(30%的丙烯酰胺)250ml

    Acr 29.2% 73g

    Bis 0.8% 2g

    7. 電極緩沖液(跑一次要配制2500ml)

    甘氨酸 43.2g 36g

    Tris 9g 或 7.5g

    SDS 3g 2.5g

    超純水定容至3000ml 超純水定容至2500ml

    8. 0.5M Tris -HCl pH 6.8儲液

    6.1g Tris先用30ml超純水溶解,再用46ml,3M HCl調pH6.8,再加水定容至100ml

    9.平衡液儲液

    脲(即尿素) 36g

    甘油 30% 30ml

    SDS 1% 1g

    0.5M Tris-HCl pH6.8 10ml 超純水定容至100ml

    10. 平衡液A(一根膠條)

    DTT 20mg

    平衡液儲液 10ml

    11.平衡液B(一根膠條)

    碘乙酰氨 300mg

    平衡液儲液 10ml

    0.05%溴酚蘭 15ul (平衡液A、B均需臨時配制)

    12.0.5%瓊脂糖10ml

    瓊脂糖 0.05g

    電極緩沖液 10ml

    溴酚蘭 25ul

    補:4、5、6的溶液需過濾后儲存于4℃備用。

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