（4）10% 過硫酸銨，5ml（0.5g過硫酸銨, 加5ml蒸餾水, 新鮮配置），-20℃保存一個月左右。
（5）10% （w/v）SDS，10g SDS加蒸餾水100ml, 室溫保存。
（6）10% TEMED 0.1ml TEMED , 加0.9 ml蒸餾水。
（7） 2×上樣緩沖液（10ml）：0.6ml 1mol/L Tris-HCL (pH6.8)，4ml 50%的甘油，2ml 10% SDS，
2ml 1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT），1ml 1%溴酚藍，0.9ml蒸餾水，可在4℃存放數周，或在-20℃保存數月。
（8） 5×電泳緩沖液 （1L）：15.1g Tris堿，72g甘氨酸，50ml 10%SDS 加蒸餾水至1L，pH 8.3。
（9）考馬斯亮藍染色液：1.0g考馬斯亮藍R-250，450ml甲醇，100ml冰醋酸，450ml蒸餾水定容至 1000ml。
（10）考馬斯亮藍脫色液：100ml甲醇，100ml冰醋酸，800ml蒸餾水。
【實驗方法與步驟】
1. 分離膠的制備
（1）凝膠中丙烯酰胺的百分比濃度（X％）與蛋白質的分辨范圍
（2）分離膠的配方：
30％丙烯酰胺儲存液、4 ×分離膠緩沖液、蒸餾水、10%過硫酸銨、TEMED
灌制分離膠。
（3）分離膠的灌制：
（1）按說明書組裝好凝膠模具，對于Bio-Rad 微型凝膠系統，在上緊夾具之前，必須確保兩塊凝膠玻璃板和底部的封膠橡膠條緊密接觸，避免漏膠。
（2）將30％丙烯酰胺儲存液與4x分離膠緩沖液以及蒸餾水在一個小燒杯中混合。
（3）加入過硫酸銨和TEMED后，輕輕攪拌混勻(凝膠會很快聚合，操作要迅速)。
（4）將凝膠溶液用吸管沿長玻板壁緩慢加入制膠模具中，避免產生氣泡。凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5cm（距梳子齒約 0.5cm），接著在分離膠溶液上輕輕覆蓋約1cm高的蒸餾水以封膠。約30min后，若在分離膠與水層之間可見一個清晰的界面，表明凝膠已聚合。
3. 濃縮膠的配方 5%的濃縮膠4ml， 用于Mini-Protein Ⅲ 型電泳槽
4. 濃縮膠的灌制
（1）向一側傾斜制膠模具，吸掉覆蓋在分離膠上的水；將30％丙烯酰胺儲存液與4x濃縮膠緩沖液及蒸餾水在小燒杯內混合，加入過硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻。
（2）將濃縮膠溶液用吸管加至分離膠上面，直至前玻璃板的上緣。
（3）迅速將點樣梳插入凝膠內，直至梳齒的底部與前玻璃板的上緣平齊。待凝膠聚合 (約30min) 后，小心拔出點樣梳。
5. 預電泳 將1X電泳緩沖液加入內外電泳槽，使凝膠的上下端均能浸泡在電泳緩沖液內；接通電源，上槽為負極，下槽為正極，80V預電泳3～5min。
6. 樣品制備/上樣/電泳 將20?滋l蛋白質樣品與20?滋l 2×上樣緩沖液，在Eppendorf管中混合，100℃加熱3～5min；離心
5～10s，用微量注射器或移液器將樣品（棄沉淀）緩慢滴入凝膠梳孔中；繼續低電壓（80V）電泳至樣品進入分離膠，再將電壓調至150V，保持恒壓電泳，直至染料遷移至凝膠的底部（對于兩塊6cm×8cm×0.75mm的凝膠，約需50min），電泳結束。
小心撬開玻璃板，凝膠便貼在其中一塊板上；切去濃縮膠和某一膠角（作標記）。
7. 染色與脫色 將凝膠浸入考馬斯亮藍染色液中，置搖床上緩慢震蕩30min以上（染色時間需根據凝膠厚度適當調整）。取出凝膠在水中漂洗數次，再加入考馬斯亮藍脫色液、震蕩。凝膠脫色至大致看清條帶約需1h，完全脫色則需更換脫色液2～3次，震蕩達24h以上。
凝膠脫色后可通過掃描、攝錄等方法進行蛋白質定量檢測。
【注意事項】
1. 凝膠不聚合的可能原因
（1）試劑質量差，應使用電泳級別的試劑。
（2）過硫酸銨和TEMED的量不夠或失活，可增加劑量或重配新鮮的儲存液。
（3）凝膠聚合時溫度太低，應以室溫為宜。
2． 上樣時，樣品不能沉到加樣孔底部，可能是上樣緩沖液中甘油含量不足；或是加樣孔底部留有聚合的丙烯酰胺。
3． 經過煮沸的樣品雖然可以在-20℃保存數周，但若反復凍融會導致蛋白質的降解。從-20℃取出的樣本，上樣前應先升至室溫，確保SDS沉淀溶解。
4． 注意避免電泳條帶彎曲畸變：①“微笑”
現象（如圖25－1所示），可能是因為凝膠中間部分溫度過高，降低電壓便可得到改善.②“皺眉”現象，常常是因為凝膠底部有氣泡或聚合不均勻。③“拖尾”、“紋理”現象，則多為樣品溶解不佳，增加蛋白樣品的溶解度并離心除去不溶性顆粒即可克服。④“暈輪”效應（holo
effect）多為加樣過量所致。
5． 非特異性的染色主要是由于未溶解的染料的沉積而成，應將染料溶液過濾后再用。
6． 如果電泳后將對蛋白質進行定量檢測，須特別注意：1）已知和未知樣品必須使用相同的溶劑系統、相同的濃度、相同的加樣量，并在同一塊凝膠上電泳和染色。