動物實驗基本技術1

第一節 實驗動物的抓取和固定

在進行實驗時，為了不損傷動物的健康，不影響觀察指標，并防止被動物咬傷，首先要限制動物的活動，使動物處于安靜狀態，工作人員必須掌握合理的抓取固定方法。抓取動物前，必須對各種動物的一般習性有所了解。操作時要小心仔細、大膽敏捷、熟練準確、不能粗暴，不能恐嚇動物，同時，要愛惜動物，使動物少受痛苦。
一、小鼠
小鼠性情較溫順，一般不會咬人，比較容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上，在小鼠向前掙扎爬行時，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚，將小鼠置于左手掌心、無名指和小指夾其背部皮膚和尾部，即可將小鼠完全固定。在一些特殊的實驗中，如進行尾靜脈注射時，可使用特殊的固定裝置進行固定,如尾靜脈注射架或粗的玻璃試管。如要進行手術或心臟采血應先行麻醉再操作,如進行解剖實驗則必須先行無痛處死后再進行。
二、大鼠
大鼠的門齒很長，在抓取方法不當而受到驚嚇或激怒時易將操作者手指咬傷,所以,不要突然襲擊式地去抓它，取用時應輕輕抓住其尾巴后提起，置于實驗臺上，用玻璃鐘罩扣住或置于大鼠固定盒內，這樣即可進行尾靜脈取血或注射。如要作腹腔注射或灌胃等操作時，實驗者應戴上棉紗手套(有經驗者也可不戴)，右手輕輕抓住大鼠的尾巴向后拉，但要避免抓其尖端，以防尾巴尖端皮膚脫落，左手抓緊鼠兩耳和頭頸部的皮膚，并將大鼠固定在左手中，右手即可進行操作。
三、家兔
家兔比較馴服，不會咬人，但腳爪較尖，應避免家兔在掙扎時抓傷皮膚。常用的抓取方法是先輕輕打開籠門，勿使其受驚，隨后手伸入籠內，從頭前阻攔它跑動。然后一只手抓住兔的頸部皮毛，將兔提起，用另一只手托其臀，或用手抓住背部皮膚提起來，放在實驗臺上，即可進行采血、注射等操作。
因家兔耳大，故人們常誤認為抓其耳可以提起，或有人用手挾住其腰背部提起均為不正確的操作。
在實驗工作中常用兔耳作采血、靜脈注射等用，所以家兔的兩耳應盡量保持不受損傷。家兔的固定方法有盒式固定和臺式固定。盒式固定適用于采血和耳部血管注射，臺式固定適用于測量血壓、呼吸和進行手術操作等。
四、豚鼠
豚鼠膽小易驚，抓取時必須穩、準、迅速。先用手掌扣住鼠背，抓住其肩胛上方，將手張開，用手指環握頸部，另一只手托住其臀部，即可輕輕提起、固定。
五、蟾蜍
抓取蟾蜍時，可先在蟾蜍體部包一層濕布，用左手將其背部貼緊手掌固定，把后肢拉直，并用左手的中指、無名指及小指夾住，前肢可用拇指及食指壓住，右手即可進行實驗操作。抓取蟾蜍時不要擠壓兩側耳部突起的毒腺，以免蟾蜍將毒液射到使用者眼睛里。需要長時間固定時，可將蟾蜍麻醉或毀腦脊髓后，用大頭針釘在蛙板上。
六、狗
用狗做實驗時，為防止其咬傷操作人員，一般先將狗嘴綁住。對實驗用狗，如畢格狗或馴服的狗，綁嘴時操作人員可從其側面靠近并輕輕撫摸頸部皮毛，然后迅速用布帶綁住狗嘴；對家養的笨狗或未經馴服的狗，先用長柄捕狗狗夾夾住狗的頸部，將狗按倒在地，再綁嘴。如果實驗需要麻醉，可先使動物麻醉后再移去狗夾。當狗麻醉后，要松開綁嘴布帶，以免影響呼吸。

第二節 實驗動物的編號和分組

一、編號
實驗動物常需要標記以示區別。編號的方法很多，根據動物的種類數量和觀察時間長短等因素來選擇合適的標記方法。
(一)掛牌法：將號碼烙壓在圓形或方形金屬牌上(最好用鋁或不銹鋼的,它可長期使用不生銹),或將號碼按實驗分組編號烙在栓動物頸部的皮帶上，將此頸圈固定在動物頸部。該法適用于狗等大型動物。

(二)打號法：用刺數鉗(又稱耳號鉗)將號碼打在動物耳朵上。打號前用蘸有酒精的棉球擦凈耳朵，用耳號鉗刺上號碼，然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。該法適用于耳朵比較大的兔、狗等動物。
(三)針刺法：用七號或八號針頭蘸取少量碳素墨水，在耳部、前后肢以及尾部等處刺入皮下，在受刺部位留有一黑色標記。該法適用于大小鼠、豚鼠等。在實驗動物數量少的情況下，也可用于兔、狗等動物。
(四)化學藥品涂染動物被毛法：經常應用的涂染化學藥品有
涂染紅色：0.5％中性紅或品紅溶液。
涂染黃色：3-5％苦味酸溶液。
涂染黑色：煤焦油的酒精溶液。
根據實驗分組編號的需要，可用一種化學藥品涂染實驗動物動物背部被毛就可以。如果實驗動物數量較多，則可以選擇兩種染料。該方法對于實驗周期短的實驗動物較合適，時間長了染料易退掉；對于哺乳期的子畜也不適合，因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉。
(五)剪毛法：該法適用于大、中型動物，如狗、兔等。方法是用剪毛刀在動物一側或背部剪出號碼，此法編號清楚可靠，但只適于短期觀察。

(六)打孔或剪缺口法：可用打孔機在兔耳一定位置打一小孔來表示一定的號碼。如用剪子剪缺口,應在剪后用滑石粉捻一下,以免愈合后看不出來。該法可以編至1～ 9999號，此種方法常在飼養大量動物時作為終身號采用。

二、分組
(一)分組的原則：進行動物實驗時，經常需要將選擇好的實驗動物按研究的需要分成若干組。動物分組應按隨機分配的原則，使每只動物都有同等機會被分配到各個實驗組與對照組中去，以避免各組之間的差別,影響實驗結果，特別是進行準確的統計檢驗,必須在隨機分組的基礎上進行。
每組動物數量應按實驗周期長短、實驗類型及統計學要求而定。如果是慢性實驗或需要定期處死動物進行檢驗的實驗，就要求選較多的動物，以補足動物自然死亡和認為處死所喪失的數量，確保實驗結束時有合乎統計學要求的動物數量存在。

(二)建立對照組：分組時應建立對照組。1.自身對照組：是指實驗數據而言。實驗動物本身在實驗處理前、后兩個階段的各項相關數據就分別是對照組和實驗組的實驗結果，此法可排除生物間的個體差異。2.平行對照組：有正對照組和負對照組兩種。給實驗組動物某種處理，而給正對照組用同樣方法進行處理，但并不采用實驗所要求的藥物或手段，負對照組則不給任何處理。3.具體分組時，應避免人為因素, 隨機把所有的動物進行編號，然后令其雙數為Ａ組(實驗組),單數為B組(對照組)即可或反之。如果要分若干個組時，應該用隨機數字表示進行完全隨機分組。