Invitrogen提供了大量的涵蓋面廣的蛋白分離預制膠,包括不同的成分,百分比濃度和格式。使用合適的膠百分比濃度,緩沖系統,上樣孔格式以及膠的厚度,對于獲得最好的結果非常重要。以下提供了幫助你選擇適合你應用的正確凝膠的信息。
E-PAGE? 96 High-Throughput System是整合的、無緩沖液系統,設計用來檢測和分析大量的蛋白樣品,時間僅僅需要14分鐘。
NuPAGE? Novex Gels組合了完美的技術和極度的可靠性。貨架期長達12個月,比其它蛋白凝膠需要的電泳時間更短,中性pH值,為大多數蛋白的分離和轉移提供優良的性能。現在可以獲得8個分離范圍,分離絕大多數不同大小的蛋白。
Novex? Tris-Glycine Gels基于傳統的Laemmli buffer system,可能被使用在所有鞍椎姆擲搿Mü齀nvitrogen公司可以獲得12種不同百分比濃度和加樣孔大小的凝膠。
Novex? Tricine Gels是分離肽和低分子量蛋白的理想凝膠。
Novex? Zymogram Gels使用gelatin或者casein作為底物分離活性蛋白酶,可以鑒定蛋白酶的大小和活性。
預制聚丙烯酰胺凝膠一般信息:
基質: 聚丙烯酰胺
厚度: 1.0mm或者1.5mm
大小: 8cm(h)x8cm(w)
cassette 大小: 10cm(h)x 10cm(w)
加樣孔格式:17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/準備 孔或者IPG孔
堆積膠:大多數Novex? gels為4%堆積膠
* Novex?預制膠適用于XCell SureLock? Mini-cell和大部分其它設計為10cm(h)×10cm(w)gel
cassette的mini-cells。E-PAGETM預制膠適用于E-Gel? Base,E-Gel?
PowerBaseTMv.4或者E-Base?單元。
選擇合適的凝膠百分比濃度
一般而言,分離分子的大小應該決定你選擇丙烯酰胺的濃度。使用低百分比濃度凝膠分離較大的分子,高百分比濃度的凝膠分離較小的分子。進行等電聚焦時,這條規則例外。參看凝膠遷移圖發現最適合你應用的凝膠。通常,為了達到最佳的分辨率,分子應該移動通過凝膠長度的70%。當蛋白分子量范圍寬或者未知,梯度膠通常是最好的選擇。
選擇加樣孔格式和凝膠厚度
我們提供大部分聚丙烯酰胺凝膠為9孔的格式(17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/準備
孔或者IPG孔)。一些類型的凝膠可以得到兩種厚度(1.0mm和1.5mm)。如果上樣量大(>30μl)時,使用較厚的凝膠(1.5mm)和較少的上樣孔(5孔)更為合適。如果blotting,記住蛋白從1.0mm的凝膠中比從1.5mm的厚膠中更容易轉移。表1總結了各種類型凝膠的特定和應用。使用表2確定哪一種上樣孔格式最適合容納你的樣品量。
表1 選擇使用膠的類型
膠的類型 | 膠濃度 | 分離范圍 | 貨架期 | 平均電泳時間 | 應 用 | |
蛋白質分析 | E-PAGE? 96 | 6% | 10-200 kDa | 1年 | 14分鐘 | 高通量、變性蛋白的分離,以進行重組生產分析和蛋白譜研究,可以電泳后染色和western blots |
NuPAGE? Bis-tris | 10%,12%,4-12% | 1.5-300 kDa | 1年 | 35-50分鐘 | pH中性,12個月貨架期凝膠。對于變性和還原蛋白具有優良的分辨率。是分析小到中等大小蛋白的最佳選擇。 | |
NuPAGE? Bis-Acetate | 7%,3-8% | 30-400 kDa | 8個月 | 60分鐘 | 8個月貨架期的高性能凝膠。對于較大的蛋白效果極佳。也能夠用來做非變性電泳(native)。 | |
Tris-Glycine | 4%,6%,8%,10%,12%,4-20%,4-12%,14%,16%,18%,8-16%,10-20% | 6-500 kDa | 1-2月 | 90分鐘 | 準確和可重復的分離非變性(native)和變性蛋白。可以得到各種范圍的Laemmli-style 凝膠。 | |
Tricine | 10%,16%,10-20% | 2-200 kDa | 1-2月 | 90分鐘 | 小肽的分離 | |
IEF | pH3-7,pH3-10 | pI3.0-pI8.5 | 5月 | 150分鐘 | 根據等電點分離可溶性蛋白。 | |
Zymogram | 10%(gelatin),12%(casein),4-16%(casein) | 30-200 kDa | 2個月 | 90分鐘 | 利用casein 和gelatin作為底物,確定特別活性蛋白酶。 |
聚丙烯酰胺凝膠 | 1孔 | IPG孔 | 2D孔 | 5孔 | 9孔 | 10孔 | 12孔 | 15孔 | 17孔 | |
最大上樣量/孔 | 1.0 mm厚度 | 700 μl | 7 cm IPG條 | 400 μl | 60 μl | 28 μl | 25 μl | 20 μl | 15 μl | 15 μl |
1.5 mm厚度 | n/a | n/a | 600 μl | n/a | n/a | 37 μl | n/a | 25 μl | n/a | |
推薦獲得最佳分辨率的最大上樣量* | 每條蛋白帶,考馬斯亮蘭染色 | 12 μg | n/a | 12 μg | 2 μg | 0.5 μg | 0.5 μg | 0.5 μg | 0.5 μg | 0.5 μg |
注釋:E-Gel? 要求20μl樣品量/孔 。 *NuPAGE? 膠比Tris-Glycine 或Tricine有更高的蛋白上樣能力。 |