方法:
蘇氨酸 亮氨酸 疊氮化鈉 噬菌體 乳糖 半乳糖 鏈霉素 |
Hfr:thr+ leu+ azir tonr lac+ gal+ strs F-: thr-leu-azis tons lac-gal-strr |
將 Hfr與F-同時加入裝有完全培養基的大 試管中,一定時間取樣振蕩,洗滌完全培養基,加至添加str的基本培養基(葡萄糖和無機鹽)上,只能使雜交后代生長,再把菌落分別轉移到只添加azi、T1、gal或str的選擇性培養基上。
azi T1 gal str |
8min---- 9min+--- 11min++-- 18min+++- 25min++++ |
箭頭表示基因位點位置先后
大腸桿菌只要有葡萄糖(G)則不利用其它糖類,因此基本培養基中lac+ 、lac-都能生長。選擇培養基中gal或lac只用其做碳源,沒有其它糖(碳源)。
Hfr菌株的名稱測定基因的順序 |
A 1 11 10 9 8 7 B 3 4 5 6 7 8 C 4 3 2 1 11 10 D 7 8 9 10 11 1 E 9 8 7 6 5 4 |
一個菌株只能測少數(如6個)基因,接合管便斷裂。
3、轉導
轉導是以噬菌體作為媒介,把某一細菌的DNA轉移到另一細菌,進行基因重組的過程。與雜交的區別:媒介不同(雜交是F因子,轉導是噬菌體)。轉導分為局限性轉導和普遍性轉導兩類。
3.1、普遍性轉導
烈性噬菌體浸染含基因的大腸桿菌,噬菌體DNA進入寄主后環化,水解寄主的染色體,合成的蛋白質外殼誤包裝了寄主的一段DNA,形成含基因轉導噬菌體。當它再浸染含基因的寄主時,在基因的兩端雙交換,使寄主變為。這種轉導供體的任何一個基因都可能被轉移,且幾率相等,因此稱普遍性轉導。
3.2、局限性轉導
λ噬菌體吸附在大腸桿菌表面,頭部線狀DNA被注入寄主后,DNA首先環化。 游離狀態的環化DNA復制(滾環型復制)形成許多線狀DNA,然后包裝,最后釋放出新的噬菌體,大腸桿菌被裂解——裂解生長。環化DNA整合在大腸桿菌染色體的兩個基因(bio+和gal)之間,整合狀態的噬菌體叫原噬菌體(或前噬菌體),或叫沒有侵染能力的噬菌體。含有原噬菌體的菌叫溶原化菌。在某些因素作用下原噬菌體還可從大腸桿菌染色體上剔除下來。
λ噬菌體浸染含有bio+和gal+的大腸桿菌,整合,剔除時偏向一端(不正常的剔除),裂解生長包裝,釋放出多個轉導噬菌體(攜帶大腸桿菌基因),再浸染gal-的受體,轉導噬菌體進入寄主后環化,形成部分二倍體,表型gal+,可發酵半乳糖。λ噬菌體DNA游離不整合,噬菌體不能復制,最后消失,但大腸桿菌表型由gal+變為gal-;λ噬菌體DNA整合到大腸桿菌染色體中,表型為gal+,整合的λ噬菌體還可游離出來。 λ噬菌體與大腸桿菌染色體上的gal-基因交換,新的含gal-基因的λ噬菌體不能復制最后消失,大腸桿菌表型為gal+。
提供基因的叫供體,接受基因的叫受體。提供基因的噬菌體為轉導噬菌體,接受了基因的受體叫轉導子。僅能轉移供體的個別的特定的少數的基因(只能轉移整合部位兩側的基因)為局限性,僅能轉移少數特定基因的轉導叫局限性轉導。
3.3、轉導的特點
(1)轉導是以噬菌體為介導的