[儀器、試劑、材料]
（一）儀器
恒溫水浴箱，電泳儀，凝膠成像系統，真空轉移儀，真空泵，UV 交聯儀，雜交爐，恒溫搖床，脫色搖床，漩渦振蕩器，分光光度計，微量移液器，電爐（或微波爐），離心管，燒杯，量筒，三角瓶，等。
（二）材料
總RNA樣品或mRNA樣品，探針模板DNA(25 ng)，尼龍膜
（三）試劑
NorthernMax Kit（Cat.# 1940，Ambion, Inc.），瓊脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random
Primer， dNTP Mixture，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow Fragment和10
X Buffer, Sephadex G-50,SDS，雙氧水, 滅菌水等。
[方法與步驟]
1.用具的準備：
180度烤器皿：三角錐瓶、量筒、鑷子、刀片等4小時。
電泳槽：清洗梳子和電泳槽，并用雙氧水浸泡過夜，用DEPC水沖洗，干燥備用。
處理DEPC水(2 L)備用。
2.用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染
用RNAZap擦洗梳子，電泳槽，刀片等，然后用DEPC水沖洗二次，去除RNAZap。
3.制膠：
1.稱取0.36mg 瓊脂糖加入三角錐瓶中，加入32.4mlDEPC水后，微波爐加熱至瓊脂糖完全熔解。60℃空氣浴平衡溶液 (需加DEPC水補充蒸發的水分)
2.在通風廚中加入3.6ml的10＊Denaturing Gel buffer，輕輕振蕩混勻。
注意盡量避免產生氣泡。
3.將熔膠倒入制膠板中，插上梳子
如果膠溶液上存在氣泡，可以用熱的玻璃棒或其它方法去除，或將氣泡推到膠的邊緣。注：膠的厚度不能超過0.5cm。
4.膠在室溫下完全凝固后，將膠轉移到電泳槽中，加入1x MOPS Gel Running buffer蓋過膠面約1cm，小心拔出梳子。（配制250ml 1＊MOPS Gel Running buffer，在電泳過程中補充蒸發的buffer。）
5.檢查點樣孔。
4.RNA樣品的制備
在RNA樣品中加入3倍體積的formaldehyde load dye和適當的EB（終濃度為10ug/ml）。混勻后，65℃空氣浴15min。短暫低速離心后，立即放置于冰上5min。
5.電泳：
1.將RNA樣品小心加到點樣孔中。
2.在5V/cm下跑膠（5ｘ14cm）。在電泳過程中，每隔30min短暫停止電泳，取出膠，混勻兩極的電泳液后繼續電泳。當膠中的溴紛藍（500bp）接近膠的邊緣時終止電泳。
3.紫外燈下，檢驗電泳情況，并用尺子測量18S、28S、溴紛藍到點樣孔的距離。
注意不要讓膠在紫外燈下曝光太長時間。
6.轉膜
1.用3%雙氧水浸泡真空轉移儀后，用DEPC水沖洗。
2.用RNAZap擦洗多孔滲水屏和塑膠屏，用DEPC水沖洗二次。
3.連接真空泵和真空轉移儀，剪取一塊適當大小的膜（膜的四邊緣應大于塑膠屏孔口的5mm），膜在Transfer buffer浸濕5分鐘后，放置在多孔滲水屏的適當位置。
4.蓋上塑膠屏，蓋上外框，扣上鎖。
5.將膠的多余部分切除，切后的膠四邊緣要能蓋過塑膠屏孔，并至少蓋過邊緣約2mm，以防止漏氣。
6.將膠小心放置在膜的上面，膜與膠之間不能有氣泡。
7.打開真空泵，使壓強維持在50~58mbar；立即將transfer buffer加到膠面和四周。每隔10min在膠面加上1ml transfer buffer，真空轉移2小時。
8.轉膜后，用鑷子夾住膜，于1x MOPS Gel Running buffer中輕輕泡洗10秒，去除殘余的膠和鹽。
9.用吸水紙吸取膜上多余的液體后，將膜置于UV交聯儀中自動交聯。
10.將膠和紫外交聯后的膜，在紫外燈下檢測轉移效率。(避免太長的紫外曝光時間)
12.將膜在-20℃保存。