3.結果分析:
實驗測得的藻藍蛋白純度只有0.509，比較我們班其他組的結果相差不算太大，但其他班有的組測得藻藍蛋白得純度可達到 1.7左右，相對于這個純度，我們所提取得藻藍蛋白純度時偏低的，影響藻藍蛋白純度的原因主要有以下幾個：
1)凍融次數:本實驗時采用凍融法破碎細胞，凍融法破碎細胞主要是因為藻體在凍結過程中，細胞內外的液態水形成冰晶體，造成體積膨大，對藻體細胞壁和細胞膜產生破壞作用，使其通透性加大，內容物流出。藻體凍結過程中首先是從最容易生成細小冰晶體的地方開始，然后冰晶體逐漸變大，向四周擴展，將距這些地方比較近的細胞壁和細胞膜脹破，壓破。每次凍融最容易生成細小冰晶體的地方是不一樣的，即在細胞內外形成冰晶的部位是不同的，這樣就能對細胞不同部位的細胞壁和細胞膜產生破壞，因而多次凍融能使破碎效果提高。凍融時間增加隨能使冰晶體變大，但由于受細胞內外水分含量的限制，冰晶的長大使有限度的，因而對細胞壁和細胞膜破壞只是在原有基礎上的破壞，破壞區域較少，效果較差，所以凍融時間對凍融效果影響不大。可見，在凍融法中次數對藻藍蛋白得率得影響比時間對它得影響大，多次反復凍融的細胞破碎效果比較好。我們自己只凍融了一次，其余是老師整體凍融的，所以我們凍融方面應與其他組沒有多大區別。
2)不同飽和度硫酸銨的鹽析效果：實驗過程中，飽和度在20％時，沒有明顯的沉淀，查資料得知，當飽和度在25％以下時，沒有明顯的沉淀，在25％以上后，隨著硫酸銨飽和度的增加，提取率逐步升高。從純度看，隨著飽和度的升高，純度先降后升。實驗測得的結果偏低，可能是加入硫酸銨過程中，隨著飽和度的增大，雜蛋白，藻紅蛋白和別藻藍蛋白沉淀出的量都在增大，藻藍蛋白所占的比例減小，所以純度減小。由于我們過柱時取的樣不是我們組的，所以無法考證是這兩種原因引起我們結果偏低，只能說這兩種原因對我們所得的藻藍蛋白純度會有影響。至于影響的大小，取決于各組的操作。
3)裝柱：裝柱的好壞直接影響到實驗結果，將DEAE－纖維素溶液倒入層析柱后，并保持水面高于柱面1～2cm，若液面水不足，則可能使柱間出現斷層，影響下一步的過柱。
4)過柱：用膠頭滴管吸取透析后的藻藍蛋白粗提液，伸入柱液面內，沿管壁以很慢的速度將粗提液滴到液面中部，待液面升高后可以加快滴加速度。待粗提液液面比填料高出大約只有1cm時，用少量的
0.02M，pH6.5磷酸緩沖液沖洗管壁，待填料上面的溶液澄清，無明顯藍色時，再分次加入50ml，0.02M，pH6.5磷酸緩沖液沖。
由各管光吸收值曲線圖可看出，我們接樣時間較晚，第一管光吸收值已達1.290，應該再藍色離柱底1cm左右時開始接樣，而我們是等到差不多見到樣液顯藍色時才接樣，所以曲線不是兩邊對稱的。在測各管光吸收值時，由連續5管在2.590左右，而我們只是拿最高即第四管，光吸收值為2.600那管測其藻藍蛋白純度，也許在其他管中，藻藍蛋白純度較高，因為這幾管的光吸收值偏差很小。
七、實驗總結及分析
1．螺旋藻是一種多細胞絲狀藍藻，螺旋藻是藍藻門顫藻科的單細胞藻類，內含一種特殊的色素蛋白——藻藍蛋白，約占藻體干重的10％——24.8％。據報道，藻藍蛋白可提高人體免疫機能、增強造血功能，可用作腫瘤、貧血等疾病的輔助治療藥劑；螺旋藻藍蛋白的水溶液呈澤藍色。藻膽蛋白主要有藻藍蛋白（簡稱CPC）、藻紅蛋白、異藻藍蛋白（簡稱APC）和藻紅藍蛋白四大類。螺旋藻中是以
CPC和APC為主。從藻藍蛋白三維結構而言，是由a—和p—亞基構成，每個亞單位有1——2個被稱為“藻膽素”發色基組成。螺旋藻為藍藻的一個屬，含有多種營養成分，具有營養及醫療保健功能，它被世界糧農組織（FAO）譽為21世紀人類最理想、最完美的食品。螺旋藻中尤以蛋白質含量最為豐富，是大豆蛋白質的兩倍，是目前已知植物中蛋白質含量最高的一種。它由18種氨基酸組成，氨基酸組成合理并含有人體所必需的8種氨基酸。但是，目前，螺旋藻主要以干粉形式直接應用食品行業，由于受其溶解性質的局限性，使其應用受到一定的限制螺旋藻是絲狀的多細胞藍藻,因含有多種對人體有益的營養物質而受到廣泛的關注,其突出特點是氨基酸種類齊全且蛋白質含量高,其中含量最高的藻藍蛋白(PC)和別藻藍蛋白(APC)一直是基礎研究的熱點,因為它們不僅在光合作用的原初反應機理的探索方面有重要意義,而且可以作為生物體內的熒光示蹤物質,作為天然的色素蛋白也具有十分廣闊的應用前景。但由于分離純化的困難,現有的藻膽蛋白商品價格昂貴,使它的應用受到了一定的限制。
2．實驗可以分為三大步驟：細胞破碎、粗提取、過柱純化。細胞破碎方法有：反復凍融法、
化學試劑處理法、溶脹法、超聲波法、組織搗碎法等；粗提取方法有：鹽析法、結晶法、等電點沉淀法、超濾法等；純化方法有：DEAE—纖維素離子交換柱法、羥基磷灰石柱層析法、
葡萄糖凝膠柱層析法等。我們的實驗是采用凍融法破碎細胞，鹽析法進行粗提，DEAE—纖維素離子交換柱法進行純化。
3．我們實驗得到的A620/A280＝0.
509。參考各方面的文獻資料，若基本按照我們的實驗操作方法，得到的A620/A280<2，其他組最高也有1.8
左右，表明我組的實驗過程存在一定的不足，我覺得關鍵是純化過程做得不好，如柱子裝得不直，填料上下密度不均，上樣時沒有關閉開關，滴加速度太快等。
4．根據我查找的論文，在純化這一步驟采用多種類型的層析柱進行純化后，A620/A280最高值可以達到14。因此我建議03級再做這個實驗時，到純化時，可以加多一條羥基磷灰石柱、葡萄糖凝膠柱與DEAE—纖維素離子交換柱結合使用，實驗結果得到的純化結果會大大提高。