(一)實踐目的
組織培養是一個技操作性很強的技術,需要多看多做,通過實踐,掌握植物外植體表面消毒技術,莖尖切割技術及培養技術。
(二)實踐用具與材料
超凈工作臺、18cm手術彎剪、16cm鑷子、接種盤、毛刷、紗布、培養瓶。帶嫩芽的枝條若干、培養基250瓶、洗衣粉1袋、2%新潔爾滅500mL、75%酒精4L、0.1%升汞1L。
(三)實踐學時與場地
8學時,植物組培實驗室
(四)實踐內容
1、外植體的選取及預處理
⑴外植體選取
選取生長健壯、已發芽、長勢較好、無病害的植物帶芽的枝條作為外植體。
⑵材料預處理
取帶芽的枝條,用洗衣粉適量沖洗,然后扳取或用清潔剪刀剪取帶芽部位(約1cm×1cm大小),頂芽和腋芽、大芽和小芽分開。繼續用洗衣粉清洗10分鐘,清洗時需不停晃動。再用自來水沖洗干凈,置空培養瓶備用。
2、外植體消毒
⑴蒸餾水沖洗
外植體置于已殺菌開機的超凈工作臺上,新潔爾滅洗液消毒雙手,用無菌蒸餾水清洗外植體2-3次,需晃動。
⑵酒精消毒
75%酒精倒入裝外植體的容器內,消毒外植體30-60s,時間長短視植物材料情況而定。動作一定迅速,需晃動。然后將酒精倒去。
⑶升汞消毒
1%生汞倒入裝外植體的容器內,消毒外植體5-10min,時間長短視情況而定。需晃動,在最后3min靜置,升汞注滿容器,將已灼燒的鑷子放入容器升汞內浸泡。
⑷蒸餾水清洗
用鑷子將外植體取出,放入另一無菌蒸餾水瓶中清洗,反復清洗4次。
⑸莖尖的剝離
用灼燒冷卻的鑷子和剪刀對外植體進行處理,剝離外植體材料芽外部小葉片,露出尖端生長點和2-3片葉原基部分,將此部分剪下做培養材料。再用無菌蒸餾水清洗3-4次。
⑹接入培養基
培養基瓶放入工作臺內,將剝離的材料分別用消毒過的鑷子放入培養瓶內,蓋上瓶蓋,置培養籃內,寫上培養時間、操作人及培養品名,入培養室培養。
(五)作業
寫出實踐報告,簡述無菌接種操作程序與體會。
(六)評分標準
明確莖尖培養程序,無菌接種操作熟練無菌,酒精、升汞處理時間得當,接種成功率﹥50%。