植物細胞的微核檢測技術材料、原理和步驟

一、原理：

微核(micronuclei)簡稱MCN,是真核類生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經輻射或化學藥物的作用而產生的。在細胞間期，微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外，大小應有主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣，也具合成DNA的能力。

一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產生的，整條染色體或幾條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在細胞分裂(cell division)末期被兩個子細胞核所排斥便形成第三個核塊。

微核率的大小是和用藥的劑量或輻射累積效應呈正相關，這一點和染色體畸變的情況一樣。所以許多人認為可用簡易的間期微核計數來代替繁雜的中期畸變染色體計數。由于大量新的化合物的合成，原子能應用，各種各樣工業廢物的排出，使人們很需要有一套高度靈敏，技術簡單的測試系統來監視環境的變化。只有真核類的測試系統更能直接推測誘變物質對人類或其它高等生物的遺傳危害，在這方面，微核測試是一種比較理想的方法。目前國內外不少部門已把“微核測試用于輻射損傷、輻射防護、化學誘變劑、新藥試驗、染色體遺傳疾病及癌癥(cancer)前期診斷等各方面。

二、步驟：

1、大蒜幼根的培養：提前3~5天進行培養，將大蒜瓣剝去外邊膜質枯皮，下端可見許多微微凸起的根原體，將蒜瓣架在燒杯（大小與蒜瓣適宜）口上，杯中盛滿清水，使蒜瓣的下部浸入水中，置溫暖處，注意每天換水，經3~5天后，即可長出1-2cm的嫩根。

2、處理根尖：陽性檢測采用M CrO3，M NaN3，M EMS，對照用自來水處理，處理時間24h。

3、恢復培養：處理后的根尖用自來水浸洗3次，每次2-3min，洗凈后在水中恢復培養24h。

4、固定：用甲醛：冰醋酸（3：1）固定液固定24h后棄去固定液，或換入70％酒精中保存。

5、酸解：棄去固定液，用清水漂洗2-3次，吸凈水，加入6M鹽酸，于室溫解離10min，棄去鹽酸，漂洗根尖2-3次，徹底洗凈鹽酸。

6、染色：截下1-2mm長的根尖，滴加石炭酸品紅染液，染色10min，加蓋玻片，壓片觀察。

三、理論補充：

1、 微核是無著絲點的染色體斷片，在有絲分裂后期不能向兩極移動，所以游離于細胞質中，在間期細胞核形成時，即可在它附近看到一到幾個很小的圓形結構，直徑大約是細胞直徑的1／20－1／5，這就是微核（micronucleus）。微核是常用的遺傳毒理學指標之一，指示染色體或紡錘體的損傷。

2、 染色體斷裂實際上就是染色體的缺失。如果進行染色體畸變分析，首先要做染色核型分析（包括正常和異常的）。染色體數目多，形狀小，則適于做核型分析的中間分裂相不易得到，而且核型分析時需要較好的遺傳學知識，還需要較豐富的經驗。與之比較，微核法是一種不需特殊試劑及設備，快速而簡便的檢測方法。

3、 固定是借助于物理方法或化學藥劑的作用，迅速透入組織和細胞將之殺死，并且使其結構和內含物如：蛋白質，脂肪，糖類以及核物質與細胞器等，在形態結構上盡可能保持生活時的完整和真實狀態，同時更易于染色，可以較清楚的顯現細胞在生活時不易看清的結構。

4、 分離的作用是去除未固定的蛋白質, 同時使胞間層的果膠類物質解體，細胞分散而易于觀察。