UPLC檢測器校驗

　　VWD檢測器或TUV/DAD/PDA檢測器

　　（1）波長準確度

　　①原理

　　檢測器的波長準確度是一個關鍵性參數，尤其當測定有關物質含量時，波長不準確可能直接影響有關物質的相對響應因子。

　　②接受標準

　　VWD或TUV/DAD/PDA（咖啡因）：（205、245、273）±2nm；

　　（2）基線噪音和漂移

　　①原理

　　基線噪音直接影響樣品雜質的檢測限度，而線性對于純度測定和含量測定的準確度具有決定性意義。

　　②可接受標準

　　安捷倫操作系統：

　　基線噪音≤0.1mAU

　　基線漂移≤5mAU/Hr（基線漂移有正負，取絕對值）

　　Waters操作系統（empower）：

　　平均峰到峰≤1×10-4 AU

　　檢測器漂移≤5×10-3AU/Hr（基線漂移有正負，取絕對值）

　　島津操作系統基線噪音≤100μV

　　基線漂移≤2500μV /30min

　　（3）檢測器線性

　　①原理

　　定量測定時，在一定濃度范圍內檢測器的響應必須與樣品濃度成線性。

　　②可接受標準

　　檢測器的響應應當與樣品濃度成線性：

　　峰面積之于進樣濃度的相關系數r≥0.9990。

　　③測定方法

　　試劑：咖啡因UPLC甲醇超純水

　　測試溶液

　　A.方法一

　　貯備液的配制：精密稱取15.5mg固體咖啡因標準品，置25ml棕色量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度。

　　B.方法二：

　　貯備液：0.5mg/ml的液體咖啡因標準品

　　操作步驟

　　設置進樣序列：在樣品盤中任意放置進樣瓶，在工作站上設置序列進樣，處理色譜圖并打印處理結果。

　　計算

　　所有計算都應當采用應用軟件計算。本節的目的是說明如何判斷結果。

　　結果判斷

　　測試活動應當被記錄在儀器使用記錄中，測試結果記錄在校驗記錄中。

　　（二）RID檢測器

　　測試項目：基線噪音，檢測器線性，檢測器定量限，檢測器檢測限

　　①原理

　　基線噪音直接影響樣品雜質的檢測限度，而線性對于純度測定和含量測定的準確度具有決定性意義。

　　②可接受標準

　　基線噪音：≤10nRIU

　　基線漂移：≤400nRIU/Hr（基線漂移有正負，取絕對值）

　　甘油檢測限：≤5×10-3mg/ml(即：此濃度下S/N≥3)

　　甘油定量限：≤1.5×10-2mg/ml(即：此濃度下S/N≥10)

　　線性：r≥0.9990，濃度與峰面積的比值的RSD≤5.0%

　　③測定方法

　　儀器設備:電子天平、容量瓶和移液管

　　試劑:甘油（AR）超純水

　　測試溶液

　　貯備溶液：取甘油625mg，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度。

　　線性標準溶液：見下表

　　STD-1(0.5mg/ml)、STD-2(1.0mg/ml)、STD-3(1.5mg/ml)、STD-4(2.5mg/ml) 、STD-5(5.0mg/ml)。

　　檢測限和定量限測定標準溶液：

　　檢測限測定標準溶液STD-D：精密量取STD-1標準溶液1.0ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度。

　　定量限測定標準溶液STD-Q：精密量取STD-1標準溶液3.0ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度。

　　操作步驟

　　進樣序列：依次測定基線噪音和漂移、檢測限和定量限、線性，處理色譜圖并打印處理結果。

　　計算

　　所有計算都應當采用應用軟件計算。本節的目的是說明如何判斷結果。

　　基線噪音和漂移:使用工作站自帶軟件計算基線噪音和漂移。

　　定量限和檢測限測定:使用工作站自帶軟件計算甘油色譜峰的信噪比。

　　檢測器線性:計算峰面積與進樣濃度的比值的RSD；峰面積之于進樣濃度的相關系數r。

　　儀器與工作站:儀器應當能與工作站正常連接，工作站應當能正常采集數據、處理數據和打印結果。

　　（三）熒光檢測器

　　（1）波長準確度

　　①原理

　　檢測器的波長準確度是一個關鍵性參數，尤其當測定有關物質含量時，波長不準確可能直接影響有關物質的相對響應因子。

　　②可接受標準

　　水拉曼峰：397±3nm

　　③測定方法

　　直接在控制面板上操作，記錄結果。

　　（2）基線噪音

　　①原理

　　基線噪音直接影響樣品雜質的檢測限度，而線性對于純度測定和含量測定的準確度具有決定性意義。

　　②接受標準

　　平均峰到峰（PTOP）≤1.0EU

　　檢測器漂移≤10.0EU/Hr

　　③測定方法

　　儀器設備:阻尼管（50cm“length”×0.005“ID”）

　　試劑:超純水

　　操作過程

　　開啟儀器，如上設置色譜條件，預熱30分鐘

　　運行方法，采集30分鐘信號

　　計算

　　工作站處理色譜圖，選擇合適模板打印色譜圖。

　　結果判斷

　　測試活動應當被記錄在儀器使用記錄中，測試結果記錄在校驗記錄中。

　　（3）檢測器線性

　　①原理

　　定量測定時，在一定濃度范圍內檢測器的響應必須與樣品濃度成線性。

　　②可接受標準

　　檢測器的響應應當與樣品濃度成線性：

　　進樣濃度與峰面積的比值的RSD≤5.0%；峰面積之于進樣濃度的相關系數r≥0.9990。

　　③測定方法

　　儀器設備:無

　　試劑:萘UPLC甲醇超純水

　　測試溶液

　　標準液的配制：精密稱取10.0mg萘對照，置100ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度。精密移取1ml至100ml容量瓶,用甲醇定容。

　　進樣序列：依次測定檢測器線性，進樣殘留。處理色譜圖并打印處理結果。

　　操作步驟

　　設置進樣序列：在樣品盤中任意放置進樣瓶，在工作站上設置序列進樣，處理色譜圖并打印處理結果。

　　計算

　　所有計算都應當采用應用軟件計算。此處目的是說明如何判斷結果。

　　檢測器線性:計算進樣濃度與峰面積的比值的RSD；峰面積之于進樣濃度的相關系數r。

　　儀器與應用軟件連接：儀器與用軟件之間的連接正常。采集、處理和報告數據正常。

　　（四）蒸發光散射檢測器

　　測試項目：重新性、基線噪音

　　①原理

　　基線噪音直接影響樣品雜質的檢測限度，而重現性對于測定的準確度具有決定性意義。

　　②可接受標準

　　定性重復性應≤1.5%；

　　定量重復性應≤4.0%

　　基線噪音應≤1mv

　　基線漂移應≤5mv/30min

　　最小檢測濃度≤5×10-6g/ml膽固醇-甲醇溶液

　　③測試條件

　　儀器設備：超高效液相色譜儀

　　標準溶液

　　STD1：5.0ug/ml (5×10-6g/m L) 的甲醇中膽固醇溶液，取200μg/ mL甲醇中膽固醇溶液0.5ml，置20ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，搖勻即可。

　　STD2：200μg/ mL甲醇中膽固醇溶液，可以直接購買標準溶液或自己配制。

　　200μg/ mL甲醇中膽固醇溶液的配制：精密稱取20mg膽固醇，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，搖勻即可。

　　操作過程

　　開啟儀器，如上設置色譜條件，預熱30分鐘，按下述序列進樣，記錄色譜圖。

　　結果判斷

　　測試活動應當被記錄在儀器使用記錄中，測試結果記錄在校驗就中。