1、染色特異性和敏感性的測定方法
（1）特異性染色和效價測定
直接染色法中效價以倍比稀釋如1：2、1：4、1：8……，與相應抗原標本作一系列染色，熒光強度在“+++”的最大稀釋度，為其染色滴度（效價）或單位。實際染色時，可取低一個或兩個稀釋度（即2~4個單位），如染色效價為1：64，實際應用時可取1：32或
1：16。間接染色法中效價可按抗核抗體熒光染色法步驟，先用不同稀釋度的熒光抗體染色，結果以抗核抗體熒光強度“++”為標準，染色用效價和直接法相同。
（2）非特異性染色測定
根據熒光抗體的用途不同，可用類似的抗原切片或涂片，倍比稀釋熒光抗體，按常規染色，結果在標本上出現的非特異染色應顯著低于特異性染色，否則應采取消除非特異性染色的方法處理熒光抗體。
（3）吸收試驗
在熒光抗體中加入過量相應抗原，于室溫中攪拌2h后，移入4℃冰箱過夜，3000r/min，離心30min，收集上清液，再用于相應抗原陽性標本染色，結果應不出現明顯陽性熒光。
2、F/P比值的測定方法
F（熒光素）和P（抗體蛋白）的克分子比值反映熒光抗體的特異性染色質量，一般要求F/P的克分子比值為1~2。過高時，非特異性染色增強；過低時，熒光很弱，敏感性降低。
（1）蛋白質定量 測定熒光抗體的蛋白質mg/ml量。
（2）結合熒光素定量 先制作熒光素定量標準曲線，即準確稱取FITC 1mg，溶于10ml 0.5mol/L
pH9.0碳酸鹽緩沖液中，再用0.01mol/L pH7.2
PBS稀釋到100ml，此時熒光素含量為10μg/ml。以此為原液，再倍比稀釋9個不同濃度的溶液，用分光光度計在490nm波長測定光密度值（OD），以光密度為縱坐標，熒光素含量為橫座標，作標準函數圖。熒光素與蛋白質結合后，其吸收光譜峰值向長波方向位移約5nm，FITC和蛋白質結合后由490nm變為493-495nm，RB200和蛋白質結合后變為595nm。
F/P比值的計算：
F/P克分子比值=（FITC g/ml）/（蛋白質mg/ml）×（160000×103）/（390×106）=0.41×（FITC g/ml）/（蛋白質mg/ml）
式中160000為抗體蛋白質的分子量，390為FITC的分子量。蛋白質從克換算為毫克需再乘以103，而熒光素從克換算為微克需要再乘以106。
測定RB200熒光抗體的克分子比值公式如下：
RB200熒光抗體的克分子比值=[（RB200 g/ml×10-3）/580] /[（蛋白質mg/ml）/160000（IgG）]
TMRITC熒光抗體克分子量比值=A515nmOD/A280nmOD 或=重量比（g/g）×（160000/580）
3、熒光抗體的保存
以0~4℃或-20℃低溫保存，防止抗體活性降低和蛋白變性。最好加入濃度為1：5000的硫柳汞或者 1：10000，疊氮化鈉防腐，小量分裝如0.1~1ml，真空干燥后更易長期保存。