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  • 發布時間:2020-09-14 16:56 原文鏈接: 單克隆抗體的制備方法2

    (2)飼養細胞:在組織培養中,單個或少數分散的細胞不易生長繁殖,若加入其它活細胞,則可促進這些細胞生長繁殖,所加入的這種細胞數被稱為飼養細胞。在制備McAb的過程中,許多環節 需要加飼養細胞,如在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養過程中,加入飼養細胞是十分必要的。常用的飼養細胞有:小鼠腹腔巨噬細胞(較為常用)、小鼠脾臟細胞或胸腺細胞。也有人用小鼠成纖維細胞系3T3經放射線照射后作為飼養細胞。飼養細胞的量為一般為2×104或105細胞/孔。
     
      2.細胞融合的步驟
     
      (1)制備飼養細胞層:一般選用小鼠腹腔巨噬細胞。
     
      與免疫小鼠相同品系的小鼠,常用BALB/C小鼠,6~10周
     

     
      拉頸 處死,浸泡在75%酒精內,3~5min
     
      ↓
     
      用無菌剪刀剪開皮膚,暴露腹膜
     
      ↓
     
      用無菌注射器注入5~6ml預冷的培養液(嚴禁刺破腸管)
     
      ↓
     
      反復沖洗,吸出沖洗液
     
      ↓
     
      沖洗液放入10ml離心管,1200rpm/分離5~6min
     
      ↓
     
      用20%小牛血清(NCS)或胎牛血清(FCS)的培養液混懸,調整細胞數至1×105/ml
     
      ↓
     
      加入96孔板,100μl/孔
     
      ↓
     
      放入37。c CO2孵箱培養
     
      (2)制備免疫脾細胞
     
      最后一次加強免疫3天后小鼠拉頸處死
     
      ↓
     
      無菌取脾臟,培養液洗 一次
     
      ↓
     
      脾臟研碎,過不銹鋼篩網
     
      ↓
     
      離心,細胞用培養液洗2次
     
      ↓
     
      計數
     
      ↓
     
      取108脾淋巴細胞懸液備用
     
      (3)制備骨髓瘤細胞
     
      取對數生長骨髓瘤細胞離心
     
      ↓
     
      用無血清培養液洗2次
     
      ↓
     
      計數,取得×107細胞備用

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