在Eva
M.Brun等（2004）的實驗中，根據待測物殺螟松的結構設計了多種半抗原的組合，具有特異性的結構的是用橢圓標記出來的，在連接偶聯臂時就要充分考慮暴露這一重要的抗原表位，研究中通過對比接入偶聯臂的不同結構的半抗原，顯示充分暴露該結構的F7半抗原制備人工抗原免疫動物得到的多克隆抗體，具有最好的靈敏度和效價。（Eva
M.Brun et al，2004）
8、間隔臂的介入位點，最好遠離特征性的基團，而且要盡可能保存特異性較大的雜原子或帶側鏈的碳鏈結構，聯入的間隔臂最好在苯環或其他雜環的碳原子上，這樣可以最大程度的保證半抗原的極性與目標待測物的一致性，如果有遠離大環的碳鏈結構，那么碳鏈的末端也是一個很好的介入位點，因為這樣的結構對大環的電子排布影響較小。（Young
Ae Cho et al ，2004）
9、除了間隔臂的接入位點以外，間隔臂本身的結構也是影響半抗原合成是否成功的重要因素。雖然半抗原接入間隔臂是必要的，但間隔臂太長會導致半抗原分子的折疊，使其更接近載體蛋白，屏蔽作用增強。一些學者認為理想的間隔臂長度是中度的3－6個直鏈碳原子構成，這時得到抗體的靈敏度要高于間隔臂很短的人工抗原制備的抗體（6，13，20，21），但在另外的試驗中，使用零間隔臂的免疫原也得到了特異性很好的抗體。
在Yoo Jung
Kim實驗中，在間隔臂介入位點為最佳的時候，當間隔臂的長度在2-6之間時，分別制備了人工抗原，在載體蛋白以及其他的免疫程序一致的條件下，不同免疫原產生的抗體在親和能力和靈敏度方面都沒有明顯的差異。也說明在間隔臂長度適中的情況下，間隔臂的長度對免疫檢測的靈敏度沒有明顯的影響。
10、間隔臂的選擇，一般間隔臂要求本身不要產生針對間隔臂的抗體，而且對半抗原的結構影響要小，并且末端要含有能與載體蛋白氨基或羧基偶聯的活性基團，一般為氨基，羧基，或羥基。間隔臂與小分子半抗原連接一端，最好以單純的碳鏈連接，如果難以實現也要選擇電性較低的連接基團，試驗證明以酰胺鍵相連接，產生的抗體對間隔臂有很高的親和系數.
11、有試驗表明當聯入的間隔臂末端為羥基時，產生抗體的靈敏度要明顯高于相同條件下間隔臂以羧酸基團為末端的人工抗原制備的抗體。這可能因為含間隔臂半抗原末端不同，所以與載體蛋白的偶聯方式不同，所以含羥基的半抗原可以提高半抗原與載體的偶聯比，并且能夠更好的暴露半抗原的抗原決定簇。（Brun
et al，2004）
12、雖然對于含多個特異性結構的大分子化合物來說，用含苯環的間隔臂或零間隔臂同樣可能制備處特異性好，靈敏度高的抗體。但現在很多試驗都證明，選擇簡單的中長度的碳鏈對于半抗原合成是最佳選擇，也是小分子藥物半抗原合成選擇間隔臂的通用方法。
13、用作載體的有蛋白質類、多肽聚合物、大分子聚合物和某些顆粒，常用的有明膠、牛血清白蛋白（BSA）、人血清白蛋白（HSA）、兔血清白蛋白、卵清白蛋白（OVA）、匙孔血藍蛋白（KLH）等。選擇載體要綜合考慮分子量、活性基團、溶解度及來源，價格等因素。明膠做為載體免疫原性差，需要多次免疫。匙孔血藍蛋白（KLH）價格昂貴，雖然免疫原性強，但它激發的B淋巴細胞克隆中針對自身抗原決定簇的多，相對減少了針對半抗原的B淋巴細胞克隆，增加陽性克隆篩選的難度和工作量（Fasciglione
et
al.，1996）。一般認為，用與免疫動物親緣關系較遠的蛋白作為載體可能會更好，BSA與HSA都是良好的載體蛋白，均能刺激動物產生特異性抗體，并且BSA、HSA和OVA這幾種載體分子量適中、來源容易、價格便宜、水溶性好，故常用作半抗原載體；此外BSA、HSA和OVA都具有大量的反應基團，如氨基、羧基等，且能在水相或某些有機溶劑的混合物中充分溶解，使偶聯反應可在較高濃度的反應物存在條件下進行，據報道，每分子BSA有60個游離氨基，每分子OVA有20個游離氨基（NCBI蛋白質數據庫）可以和合成半抗原的羧基反應形成肽鍵，合成免疫原。
14、由試驗表明在單克隆抗體的制備過程中，脂蛋白－Th細胞抗原決定基載體蛋白（Pam3Cys-TH）制備抗體的靈敏度高于用BSA，KLH作為載體蛋白制備的抗體，可能因為這種載體蛋白的支鏈更長。用BSA或KLH作為載體制備抗體的親和力很差，因為分子在體內很快被腎臟系統消除，而新載體
Pam3Cys-TH就克服了這樣的問題。（Hoffmann et al.，1997； Baier et
al.，2000）。并且Pam3Cys-TH本身就可以做為佐劑使用，所以產生的免疫反應非常強，有利于產生高親和力的抗體。
因為抗原展示細胞（APC）表面是帶負電荷的，通常認為如果載體蛋白經過離子化處理帶有正電荷，就更容易結合到帶負電荷的細胞表面，能引起更強的免疫反應。（Apple et al.，1988）
以上僅是作者查文獻的一些總結，而且很多結果都不能從原理上解釋清楚，所以抗體制備的時候最好還是多考慮幾種抗原設計方案。根據初步篩選的結果確定用哪種抗原免疫的動物做融合。