２在第1排第1管中加入1∶10稀釋傷寒桿菌“Ｈ”血清0.5mL，再加入生理鹽水0.5mL于管內,連續吹吸3次，使血清與鹽水充分混合，而后吸出0.5mL注入第2管，同樣再加入生理鹽水0.5mL于管內予以混勻后吸出0.5mL注入第3管。依次類推，稀釋到第6管，自第6管吸出0.5mL棄去。此時，自第1管至第6管的血清稀釋倍數依次為1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640。第7管不加血清作為對照。
３同法用吸管吸取1∶10稀釋傷寒桿菌“Ｏ”血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀釋。
４用移液管吸取傷寒桿菌“Ｈ”菌液0.5mL分別加入第1排各管中，此時血清稀釋倍數又增加了一倍。
５同法于第2排各管中分別加入傷寒桿菌“Ｏ”菌液0.5mL。
６將各管振蕩混勻，放37℃水浴箱中2～4小時或37℃孵育箱中過夜次日取出觀察
結果。
【觀察結果】
１觀察之前切勿搖動試管，以免凝集塊分散。
２先觀察對照管，此管應無凝集現象，管內液體仍成混濁狀態。但如放置時間較長，細菌堆于管底成小圓點狀，為陰性反應。
３試驗管應自第１管觀察起，如有凝集時則于管底有不同大小的圓片狀邊緣不整齊的凝集物，上液則澄清透明或不同程度混濁。凝集的強弱可用“＋”號表示如下：
“＋＋＋＋”凝集很強，管內液體完全澄清，凝集塊完全沉于管底；
“＋＋＋”凝集強，管內液體不完全澄清，稍有輕度混濁，凝集塊沉于管底；
“＋＋”凝集中等強度，液體半澄清，凝集塊沉于管底；
“＋”凝集弱，管內液體混濁，少量凝集塊沉于管底；
“－”不凝集，管內液體和對照管同樣混濁，無凝集塊。
４最后輕輕振蕩各管，觀察凝集塊的狀態，對照管的細菌在振蕩時呈煙霧狀上升，隨即消散，細菌分散仍呈混濁狀態。“Ｈ”菌液的凝集塊疏松呈棉狀，大片沉于管底，輕搖即升起，并極易破碎。“Ｏ”菌液凝集呈緊密顆粒狀，沉于管底堅實致密，輕輕振搖不易升起，凝集顆粒較小不易搖碎。
５記錄觀察的結果并判定凝集效價，通常以能產生明顯凝集（＋＋）的血清最大稀釋倍數作為該血清的凝集效價。如血清的最低稀釋度（即第1管1∶40）仍無凝集，應報該血清效價低于1∶40。如血清的最高稀釋度（即第6管1∶1280）仍顯完全凝集現象，應報該血清效價高于1∶1280。
（二）間接凝集抑制試驗
【原理及意義】
若使可溶性抗原與相應抗體先充分反應再加入有關的免疫微球，因抗體已被可溶性抗原結合，不再出現免疫微球的被動凝集現象，叫間接凝集抑制試驗，臨床化驗檢查中常用的免疫妊娠試驗就是一種間接凝集抑制試驗。
妊娠試驗：孕婦尿中絨毛膜促性腺激素（HCG）的含量比正常尿中的高。妊娠尿中加入抗絨毛膜促性腺激素抗體時，由于發生抗原抗體反應的結果，抗體被消耗，此時再往尿中加入乳膠抗原（吸附有人類絨毛膜促性腺激素的乳膠顆粒），不再發生反應，抗原仍呈乳狀液體，即為妊娠試驗陽性。反之，被檢尿中絨毛膜促性腺激素含量甚少（非妊娠尿）不足以把加入的抗體消耗，當乳膠抗原加入后，抗體便與抗原結合發生反應，出現均勻細小顆粒，妊娠試驗為陰性。
【材料】
１試劑：吸附有人類絨毛膜促性腺激素的乳膠抗原，抗人類絨毛膜促性腺激素抗體血清，孕婦尿，正常尿。
２器材：黑反應板，玻璃蠟筆，滴管。
【方法】
１取清潔玻片一張，用蠟筆劃為二格，注明號碼，并分別滴加妊娠尿和正常尿各一滴。
２分別滴加含抗人類絨毛膜促性腺激素抗體血清各一滴，輕輕搖動，充分混勻。
３分別滴加一滴乳膠抗原，緩慢搖動3～5分鐘，觀察結果：不出現凝集者為陽性，其尿中含有HCG，表示妊娠；出現凝集者為陰性，其尿中不含有HCG，表示未妊娠。
【注意事項】
１試驗材料、用具使用前使其溫度接近室溫（20℃左右）。
２被檢尿太混濁，需要過濾。
３尿中有蛋白及血液時，不宜進行此試驗。