培養板的包被及相關問題：為了適應不同的實驗需要，可對培養板用不同的物質進行包被后使用，這其中有促進細胞黏附的，也有用于一些特殊檢測需要的。不同的實驗目的可能具體的方案亦不同，根據需要靈活掌握。
(一)多聚賴氨酸包被：
問：我要培養原代神經細胞培養，要用多聚賴氨酸鋪細胞培養板，請問賴氨酸液怎么配，怎樣鋪扳子
答：配制0.01%的多聚賴氨酸: 首先買來sigma 公司的多聚賴氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管將
少量三蒸水加到多聚賴氨酸的小塑料瓶中，然后將溶解的多聚賴氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置燒杯中)。最后加三蒸水達250ml，過濾除菌分裝與小瓶中即可。保存于-20度，近期用的話可放于4度冰箱內保存。
注意每一小瓶的量不要太滿，若20ml的瓶子，只裝15ml可，若太滿，放于-2度有可能會將瓶子弄碎，因凍后體積增加。(我就有這個教訓)
另外燒杯，小瓶、移液管都要滅菌處理的，泡酸高壓什么的。我們用的是一種用注射器過濾的過濾器，一次性的。一個能最多有效 過濾200ml。
鋪板的操作:首先要在消毒實驗室，包括超凈臺，紫外消度20-30分鐘。消毒后30分鐘進入實驗室。事先準備100ml三蒸水，經高壓滅菌處理。具體細節就不多說了。
首先打開板子，用消毒好的試管將0.01%的多聚賴氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。將板子蓋好放到培養箱中(37度 5%CO2)30分鐘。
取出板子，用吸管將多聚賴氨酸吸出。換吸管，加入三蒸水，沖洗三次，即將每孔內加入三蒸水，沒過底，多點也行。再將水吸出來。反復三次。注意換吸管，要無菌操作的。
最后將鋪好的板子放于培養箱待用。
如果你做免疫組化，需要放小的玻片到孔內，就在加多聚賴氨酸之前用無菌的鑷子將無菌的玻片夾到孔內即可。
問：PLL的分子量有3-5萬，7-15萬，15-30萬幾種，應怎樣選擇？？謝謝：）
答：我們養神經細胞，用的是分子量3萬到7萬的pll 。
以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。使用時，用高純度的蒸餾水稀釋成0.11mg/ml的使用濃度，過濾除菌，以50微升每平方厘米的量均勻涂于培養底物的表面，室溫下靜置5min，吸除多余液體，股風吹干即可。
問：多聚賴氨酸包被培養板后看上去應該是什么樣的？？
要做原代培養，為了促進細胞貼壁，擬用PLL包被培養板。
1.我買的是博士德分裝Sigma的10ml的那種，可是院子里搜了一下，有人說沒有做過細胞培養試驗，不確定能否用于細胞培養！！這怎么辦，不能用么？
2.我的方法是這樣的，取了0。5ml，加入5毫升滅菌去離子水后，分成6份0.9ml，6孔板里放上玻片（準備以后做免疫組化直接取片子的），一個孔一份，室溫5分鐘后吸掉液體，超凈臺內吹干過夜。第二天D-Hank's液洗3遍，晾干，紫外線照一會兒再用。請問這樣做有沒有硬傷？？
3.包被好后的板底及玻片應該是什么樣的呢？？我發現板子干了以后，上面有些白點點，一開始以為是水滴，后來發現不是。莫非是PLL，那也是不是太夸張了？？請問這種現象正常否？？
PDL有用于組化玻片包被的不能用于細胞培養，你在用前需先確定是細胞培養級的，細胞培養板用PDL包被完后是看不出什么的，如果有顆粒是PDL在配制是未完全溶解，可看一下說明書。
我包被完用無菌水洗板子2－3次，吹干后很干凈，以前用PBS洗，吹干后也發現有白點，考慮是PBS中的鹽沉淀。
(二)明膠包被：
問：在細胞原代培養時，在培養瓶里鋪明膠，國產的明膠也以可用嗎？它是用什么配置呢？還有怎么消毒明膠呢？請多指教，謝謝！
答：國產明膠不太好用，明膠可以用PBS溶液溶解，一般在100度煮15分鐘，趁熱分裝，分裝后放在4度，不要冰凍。
問：明膠消毒之后可以放置多長時間？還是現配現用呢？你說的分裝是指直接鋪在培養瓶嗎？如果不是的話，放在4度冰箱不是已經固定了嗎？固定之后有怎么鋪在培養瓶呢？因為是沒做過實驗所以很不明白。
答：sigma 有現成的終濃度是2%的明膠，已消毒，買來即可使用，方便而且不貴，僅100多塊錢。4度時明膠是膠凍狀，室溫下放置20-30分鐘就可變成液態，說明書上建議使用的包被密度是5-10ug/cm2。
國產明膠就可以的，用去離子水配成1%即可。可以一次配50ml或100ml。使用時取你所需量高壓滅菌即可。滅菌結束取出稍涼就可以鋪在培養瓶中。
問：明膠包板完畢后，培養皿要干燥呢還是保持濕潤？
答：明膠包被培養板或培養瓶24小時后， 將明膠倒掉，用培養基沖洗，就可以接種細胞了。
問：在園里搜索了一下關于明膠在細胞培養中的使用問題，還是有很多問題大家沒有詳細和標準的說明，現有幾個具體問題，請教各位戰友，
1.明膠溶液配置的問題:用無菌PBS配還是用去離子水配?我們實驗室有國產的明膠，很大一瓶的那種，能不能用于細胞培養?難道一定要用GIBCO 20ML即用型的?
2.明膠使用濃度的問題:有說0.1%，1%和2%的，我養的是內皮細胞，應該用哪種濃度呢?
3.明膠消毒的問題:有人說可以高溫高壓滅菌，有人說應該要過濾。。。還有人說要先高壓再乘熱過濾?不會吧，到底要怎樣?暈啊~~~
4.明膠包被培養瓶的問題:有人說包被后置培養箱過夜，用時在棄溶掉的，加PBS和培養液沖洗。。也有人說包被后吹干30min-60min 。再加培養液沖洗即可用，到底怎么個做法啊
5.明膠包被后的培養瓶使用期的問題:包被后的培養瓶能夠用多久呢?有文獻說包被7天，干2-3天后放4度保存可以在兩周內使用。
答：Q1.明膠溶液配置的問題
A1: 用去離子水來配即可。國產的行不行要去試驗，保險的就是買進口的。其實通常是買Sigma的gelatin粉末來配就好了，不用買配好現成的。配好的濃縮液可分裝放-20度長期保存，即將要用的濃縮液可放4度來備用。
Q2.明膠使用濃度的問題
A2:1%是濃縮母液的濃度，使用前才取適量稀釋成0.1%來包被。
Q3.明膠消毒的問題:
A3: Gelatin是用高溫高壓殺菌的， 其他你所說的方法也不是不能用， 只是沒必要。
Q4.明膠包被培養瓶的問題
A4:通常是包被1小時就夠了，然後吸乾，不需要清洗。因為你配gelatin溶液中並沒有含其他有害的物質， 沖洗只是多了一道沒必要的工作。包被完要清洗是Collagen才需要的。