正常人原代角膜間質細胞的分離
實驗材料：
1.完整的人角膜；
2.GMF-Saline G；
3.中性蛋白酶Ⅱ；PriCellls原代細胞分離試劑盒
4.L型膠原酶，1mg/ml在DMEM/F12/GA中；
5.GMF-Saline G配制的TrypLE Expre或0.25%胰蛋白酶；
6.DMEM/F12/GA；
7.DEME/F12/2FB/GA：DMEM/F12/GA含2%F；
8.CMF/GA；
9.3.5cm塑料組織培養皿或6孔板；
10.手術刀或單刃的安全刀片；
11.細胞濾網，70μm血液尼龍過濾網；
12.塑料刮片，“Cell Lifter”或“Cell Scraper”；
13.彎虹膜剪，11cm（4-3/8in）；
14.Jeweler&rsquo鑷，10cm（4in）；
15.角膜剪，19mm刀刃，尖頭；
16.Colibri縫紉鉗，0.1mm；
17.DS樣本緩沖液，使用終濃度：0.058mol/L Tris，5%丙三醇，1.67% SDS，0.02%溴酚藍；
18.原代細胞特制基礎培養基；
19.原代細胞培養特制添加劑；
實驗方法：
1.用GMF-Saline G清洗角膜3&time5min；
2.剪除殘留的鞏膜，結膜和虹膜；
3.加入原代細胞分離試劑盒的試劑，4℃搖床搖動過夜；
4.將加入試劑的角膜4℃搖30min；
5.用DMEM/F12/GA清洗角膜；
6.解剖顯微鏡下，小心去除上皮和內皮細胞；
7.用塑料刮片輕刮基膜的上皮細胞面和內皮細胞面。顯微鏡下觀察，以確保完全去除這些細胞層；
8.用新鮮培養基清洗角膜基質一次；
9.用手術刀或安全刀片或精細手術剪將基質剪碎成2mm左右的小塊；
10.用DMEM/F12/2FB/GA配制的膠原酶37℃消化3h，直至大多數組織消失；
11.400g離心10min，棄上清；
12.用DMEM/F12/2FB/GA重懸細胞，用70μm細胞濾網過濾消化液，并離心；
13.重復上述清洗步驟2遍，每遍之后細胞計數；
14.用MJM將分離出的間質細胞重懸并以1&time104/cm2的密度接種至塑料組織培養皿；
15.每三天更換一次原代細胞特制基礎培養基＋原代細胞培養特制添加劑；
16.當細胞達90%匯合時用胰蛋白酶消化傳代。