酶標儀的兩種分類及選購指南

酶標儀的兩種分類

多功能酶標儀是實驗室常用的一種儀器，酶標儀的分類方式一般可以按照濾光方式的不同和功能的不同進行劃分。

一、酶標儀基于濾光方式的不同可分為濾光片式的酶標儀和光柵式酶標儀。

多功能酶標儀濾光片式酶標儀采用濾光片來進行波長的選擇，酶標儀內置濾光片輪，可選擇試驗所需的不同波長的濾光片來進行分光，光源發出的全波譜光經過濾光片后，大部分被過濾，只剩下濾光片本身允許的波長通過，這樣就可就通過濾光片來獲得特定的波長。濾光片輪一般包含4-6塊濾光片，通過選擇不同的濾光片可獲得不同的波長，但是獲得的波長都是固定的，受到一定的限制，不能獲得任意所需的波長，而且更換濾光片價格比較昂貴。

一般波長固定的濾光片有405，450，490，630NM。光柵式酶標儀雖然才出現短短十年，但是發展非常迅猛，現在已經是主流的酶標儀。它采用光柵進行分光，光源發出的全波譜光線經過光柵后，通過光柵上面分布的一系列狹縫的分光，就可以獲得任意波長的光，波長連續可調，一般遞增量為1nm.光柵式酶標儀使用方便靈活，可以通過軟件選擇任意波長的光，而且可以進行全波長的掃描，通過全波長掃描可以獲得未知樣品的吸收峰，從而可以達到檢測未知樣品的目的，在實驗室中很受歡迎，可以進行更多實驗的檢測。因此目前在國內的普及程度很高。

二、按照功能的劃分，酶標儀可以分為光吸收酶標儀，熒光酶標儀，化學發光酶標儀和多功能的酶標儀。

光吸收酶標儀是用來進行可見光與紫外光吸光度的檢測。特定波長的光通過微孔板中的樣品后，光能量被吸收，而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關系，由此可以用來定性和定量的檢測。光吸收的檢測技術成熟，成本低，操作簡單，但是動態范圍窄，靈敏度比較低，特異性不強。一般可見光和紫外光分別采用鎢燈及氘燈作為光源，而紫外/可見酶標儀是可以將兩種光源進行切換，適應不同測量波長的需求。熒光酶標儀是用來進行熒光的檢測。通過激發光柵分光后的特定波長的光照射到被熒光物質標定的樣品上后，會發出波長更長的發射光，通過發射光柵后到達檢測器。熒光的強度與樣品的濃度呈一定的比例。熒光檢測靈敏度高，可實時檢測，使用方便，檢測模式多樣，但是容易受外界干擾，激發光與發射光容易互相影響，干擾檢測。

化學發光是來自生物化學反應中的自發光，可分為輝光型和閃光型兩種類型。輝光型發光持久，穩定，能持續一段時間;閃光型發光時間短，變化快，穩定性不強，需要應用自動加樣器才可以進行。化學發光中發出的光子數與樣品量呈一定比例關系，化學發光酶標儀靈敏度非常高，動力學范圍廣。 

酶標儀選購指南

作為微孔板比色計的酶標儀，其基本功能不外乎一個比色測定，所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學系統、檢測速度、震板功能、溫度控制等方面的差異。

1.1 測定波長    

一般酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間，完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶（HRP），底物通常為四甲基聯苯胺（TMB）和鄰苯二胺（OPD），其在過氧化氫溶液的存在下，經HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯（DAB）和聯苯醌。當pH值為5.0左右時，DAB在450nm波長處有zui大吸收，當pH值降為L 0時，zui大吸收波長移至492nm,同時摩爾消光系數變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產物聯苯醌在波長450nm處有zui大消光系數，如果HRP量少，H:O:和TMB過量時，則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉變為黃色的聯苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產物穩定90min.因此，450nm和492nm兩個波長是目前ELISA測定zui常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件，可以同時安裝6~8片濾光片，所配備的濾光片均應包括上述兩個波長，有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大。除了這兩個基本濾光片外，考慮到雙波長比色的需要，還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片，其他濾光片可根據需要選擇。有時，有的實驗室希望用酶標儀作微量生化測定，故酶標儀生產廠家對其生產的酶標儀擴展了紫外檢測功能，此時需要一個340nm波長濾光片。此時，酶標儀的測定波長范圍就成為340-750nm或800nm。

1.2 測定的吸光度范圍    

通常，酶標儀的吸光度測定范圍在。0-4之間即可以滿足ELISA的測定要求。在0-4.0范圍，線性誤差不超過±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內，測定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0Abs范圍內，測定精密度CV小于士0.2%。因此，對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要看看在一定的吸光度范圍內的線性和精密度如何。

1.3 光學系統    

酶標儀的光學系統采用的是垂直光路多通道（通常為8或12通道，亦有單通道）檢測，一般為硅光管或光導纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個參比通道，每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統功能如何，均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現出來。光學系統好的話，則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

1.4 檢測速度 

酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需的時間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過程中，因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標儀檢測速度都非常快，通常在數秒鐘內。

1.5 震板功能    

酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進行比色測定前對其進行振蕩混勻，使板孔內顏色均一。目前市場上常見的酶標儀均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節。

1.6 溫育功能

溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動地控制儀器內部的溫度，使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內部完成，而無需再外配溫箱。目前，只有少部分酶標儀具有此種功能，溫育功能只是酶標儀的一個附加功能，是否具有并不能說明酶標儀檔次的高低及儀器的優劣。作為實驗室是否選擇，則可根據實驗室的條件及需要來決定。