實驗概要
噬菌體ELISA是一種快速而便捷的方法，尤其是因為pⅧ有多拷貝會導致信號的擴增。
主要試劑
1. 2％MPBS
2. PBS/Tween
3. 辣根過氧化物酶(HRP)標記的小鼠抗噬菌體單克隆抗體(mAb)(Amer Sham BiOSCiences)
4. 3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺(TMB)液體底物系統(SigmaT—8665)
5. 終止液(1mol/L H2SO4)
主要設備
96孔ELISA板，例如Nunc maxisorb442404(可自VWR購得)
實驗材料
噬菌體樣品
實驗步驟
1．按每孔100ul蛋白抗原包被微量滴定板，4℃過夜。PBS中10ug/m1的濃度是包被抗原的標準濃度。但有時需要更高的濃度或者不同的包被緩沖液(比如碳酸鹽緩沖液)。
2．棄去抗原液并用PBS洗滌板孔2次。
3．加入200wl的2％MPBS封閉板孔，37℃孵育2小時。
4．用PBS洗滌板孔 3次。
5．每孔加入50ul的4％MPBS。
6．每孔加入50ul含噬菌體抗體的培養基上清，用移液器反復吹吸混勻，室溫孵育1小時。
7．棄去溶液，用PBS/Tween洗滌板孔3次，再用PBS洗滌3次。
8．將HRP標記的小鼠抗噬菌體單抗用2％MPBS按照1：5000稀釋后，每孔加入100ul；室溫孵育1小時。
9．棄去二抗，并用PBS/Tween和PBS分別洗滌3次。
10．每孔加入100ul TMB系統溶液，并在暗處室溫孵育10～30分鐘。數分鐘內，應呈現藍色。
11．每孔加入50～100ul終止液，終止反應。
12．在450nm處讀板。