人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株檢測步驟:
1. 將凋亡細胞裂解后高速離心,其上清液中含有核小體
2. 在微定量板上吸附組蛋白體
3. 加上清夜使抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結合
4. 加辣過氧化物酶標記的抗DNA抗體使之與核小體上的DNA結合
5. 加酶的底物,測光吸收制
檢測原理:
細胞發生凋亡或壞死,其細胞DNA均發生斷裂,細胞內小分子量DNA片斷增加,高分子DNA減少,胞質內出現DNA片斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有規律的發生在核小體之間,出現180-200bpDNA片斷,而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細胞的死亡,并可與壞死細胞區別。
培養細胞的常規觀察:
細胞接種或傳代以后,實驗者每天或至多間隔1~2d,要對細胞做常規性檢查。觀察細胞形態和生長情況以及培養的pH變化、有無污染等。根據細胞動態變化,做換液或傳代處理,如發現異常情況應及時采取措施。