HPLC的線性動態范圍(LinearDynanicRangeLDR)及其測試方法

　　1)線性動態范圍的定義

 國際上科技工作者對HPLC的線性動態范圍的定義是：最大線性區(保證1%相對誤差的線性區域)的吸光度值A_max，除以最小線性區(保證1%相對誤差的線性區域)的吸光度值Amin。即LDR=A_max/A_min;或最大線性區的濃度C_max除以最小線性區的濃度C_min，即LDR=C_max/C_min。

　　2)HPLC的線性動態范圍的重要性(對分析測試誤差的影響)

　　定量分析檢測時，如果HPLC使用在非線性動態區，肯定會因非線性而產生誤差。為了保證分析測試結果的可靠性，我們應使用在HPLC的線性動態區。因此，線性動態范圍是一切HPLC使用者必須高度重視的技術指標。

　　一般來說，使用者拿到一臺HPLC儀器后，總是希望對很稀的樣品分析時，其分析測試的結果在所要求的誤差范圍內。對很濃的樣品分析時，其分析測試的結果也在所要求的誤差范圍內。這就只有HPLC的線性動態范圍很寬的時候才能做到。有人認為，樣品太稀時，濃縮一下就好了，樣品太濃時，稀釋一下就是了。這是不了解分析工作或未親自作過分析工作的人說的話。因為，濃縮一下或稀釋一下談何容易?首先是增加工作量，稀釋或濃縮工作很麻煩;第二，稀釋或濃縮會帶來誤差。所以我們總是希望HPLC的線性動態范圍大(寬)且好。

　　HPLC的線性動態范圍，一般取決于儀器檢測器的噪聲和雜散光。國內外很多HPLC的生產廠商不給出HPLC的線性動態范圍。作者認為不給線性動態范圍是不對的，因為不給線性動態范圍，就意味著不知道這臺HPLC分析的樣品濃度的上限和下限。綜上所述，HPLC的線性動態范圍非常重要，它將限制儀器的使用范圍(即限制儀器的適用性)。很遺憾的是許多科技工作者目前還未對線性動態范圍引起重視。

　　3)線性動態范圍測試方法

　　HPLC的線性動態范圍的測試方法有多種。我國的計量檢定規程JJG705-2002規定：波長254nm時，采用“丙酮/2%異丙醇水溶液(丙酮含量為0.1%、0.2%、....1.0%)沖洗檢測池，并記下各溶液對應的穩定記錄儀讀數;由C_H/C_L算出檢測器的線性范圍(C_H濃度上限、C_L濃度下限)。”作者認為這種方法很不妥。因為濃度的下限是計算出來的，不是真正測試出來的下限。采用的計算公式為：C_L=2NCV/H×20(公式本身有錯誤);并且算出的下限值達到千萬分之三點一(即：0.000031%)。這樣的數據有什么意義?作者認為這種測試線性范圍的測試方法既不符合儀器學理論，又不與國際接軌，有關部門應該盡快更正。

　　目前，國際上對線性動態范圍的測試方法，一般是配置不同濃度的標準樣品(以數量級遞增)，直接在儀器上測試其吸光度。求出偏離比耳定律1%時的最大吸光度A_max和最小吸光度A_min。二者相除即是儀器的線性動態范圍LDR(Linine Dinamic Rangi)。即LDR=A_max/A_min。其具體操作是：HPLC儀器設置縱坐標為吸光度A，橫坐標為濃度C;檢測器的光譜帶寬為2nm;波長設置可以在紫外區(如要求很高時可設置在253.7nm)，也可在可見區(如500nm);試樣可任選，濃度從小到大，依次對所配試樣進行測試。作曲線，從曲線上找出偏離線性在1%以內的范圍。此范圍內的A_max/A_min就是線性動態范圍。

　　作者在研發HPLC的UV/FLD時，就是根據儀器學理論，從線性動態范圍的物理概念出發，自己配置蒽不同濃度的溶液，以數量級遞增，測出能保證1%相對誤差的下限點和上限點，二者相除，得出其線性動態范圍，效果非常好。