1. 準備工作，開水浴鍋，預熱試劑，超凈工作臺紫外照射 30min,找到對應細胞在液氮罐中的位置
2. 紫外照射后風機吹 10min 后，酒精擦拭臺面，放入試劑和離心管，取 15ml 離心管，加入 9ml 培養液
3. 在液氮罐中取出細胞，先擰松放液氮，再擰緊，將凍存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min
4. 將凍存管噴酒精后放入超凈臺內，擦干管壁，用 1ml 頭將細胞轉移到已加培養液的離心管中
5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平
6. 將離心好的細胞棄上清，加入 5ml 完全培養基重懸，用移液管吹打 8-10 次， 避免產生氣泡，將細胞懸液接種到 250px 培養皿中，補加 5ml 培養液
7. 混勻，十字法或者 8 字法
8. 將混好的細胞放入培養箱中培養
