<li id="omoqo"></li>
  • <noscript id="omoqo"><kbd id="omoqo"></kbd></noscript>
  • <td id="omoqo"></td>
  • <option id="omoqo"><noscript id="omoqo"></noscript></option>
  • <noscript id="omoqo"><source id="omoqo"></source></noscript>
  • 發布時間:2021-02-23 15:34 原文鏈接: 多肽合成與修飾技術

    實驗技術:多肽 合成是一個固相合成順序一般從C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發展成功了固相多肽合成方法以來,經過不斷的改進 和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術,表現出了經典液相合成法無法比擬的優點,從而大大的減輕了每步產品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種:固相合成和液相多肽合成。

    實驗技術原理:

    多肽合成儀以固相合成為反應原理,在密閉的防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序(序列,一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端)不斷添加、反應、合成,操作最終得到多肽載體。固相合成法,大大的減輕了每步產品提純的難度。為了防止副反應的發生,參加反應的氨基酸的側鏈都是保護的。羧基端是游離的,并且在反應之前必須活化。

    實驗操作流程:

    1、去保護:Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去除氨基的保護基團。
    2、激活和交聯:下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。活化的單體與游離的氨基反應交聯,形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反應完成。循環:這兩步反應反復循環直到合成完成。
    3、洗脫和脫保護:多肽從柱上洗脫下來,其保護基團被一種脫保護劑(TFA)洗脫和脫保護。

    多肽修飾類型:

    1、C端標記技術 :
    C端酰胺化(Amidation,C-termainal)、醛基化(Aldehydes)、醇基化(Alcohols)、pNA (p-Nitroanilide)
    AMC、AFC、巰基乙胺化(Cysteamide)、酯基化(Ester)、N-烷基化(N-Alkyl Amides)等

    2、N端標記技術 :
    乙酰化Acetylated (Acetylated)、Palmytolyl、HYNIC、生物素標記(Biotinylated)、Br乙酰化(Bromoacetylated)
    螯合反應(DOTA,DTPA conjugated)、甲醛化(Formylated)、十四烷基、十八烷基化(Myristoylated)
    琥珀酰化、棕櫚酸化、蘋果酸化、脂肪酸化等(Succinylated)

    3、熒光標記修飾:
    C端修飾:AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
    N端修飾:Biotin, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-Fam,5-Fitc等
    Rhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS
    FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA

    4、環化反應:
    首尾成環,中間成環,特殊成環(N -> C or Head to Tail)
    2對二硫鍵,3對二硫鍵(Disulfide (S-S bond formation) .Trisulfide formation)
    天然產物活性肽成環(Cyclic-natural peptides )

    5、甲基化修飾:
    側鏈甲基化Lys(For),Lys(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)
    N端甲基化(N-Me-Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N- Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)

    6、幾種特殊修飾:
    各 種偶聯(BSA, KLH conjugated peptides for antibody production )、磷酸化(Phosphoserine, Phosphothreonine, Phosphotyrosine)、磺化(Sulfated Tyrosine or Serine)、MAPS (Multiple Antigenic Peptide)、糖肽(Glycopeptides)、 PEG修飾(PEGylation)

    實驗注意事項:
    客戶提供:
    1、多肽序列、數量、純度及特殊要求
    2、凍干多肽可在-20度保存或室溫保存
    3、溶液肽遠比凍干形式不穩定,溶液應為中性PH(5-7)-20度保存。
    4、為避免樣品的反復凍融,最好分成小樣存放。

    <li id="omoqo"></li>
  • <noscript id="omoqo"><kbd id="omoqo"></kbd></noscript>
  • <td id="omoqo"></td>
  • <option id="omoqo"><noscript id="omoqo"></noscript></option>
  • <noscript id="omoqo"><source id="omoqo"></source></noscript>
  • 1v3多肉多车高校生活的玩视频