miR 和LncRNA/circRNA/mRNA 結合雙熒光素酶驗證方案
一、 檢測原理
全基因合成 miR 潛在結合位點上下游~500bp（ LncRNA、circRNA 或 mRNA 的3’UTR）野生形式 WT 及結合位點的突變形式 Mut，克隆到 psiCHECK-2 多克隆位點處（1640-1674）（圖 1），然后與 miR 的 mimics/NC 共同轉染 293T 細胞測定熒光素酶讀值即可。
圖 1 雙熒光素酶載體示意圖
二、 載體構建與 Mimics 合成
1.構建 WT miR 潛在結合位點到 psiCHECK-2 載體，命名為 WT；
2.構建 Mut miR 潛在結合位點到 psiCHECK-2 載體，命名為 Mut（突變模式：A/T 與 G/C 互變）；
3.合成待測 miR 的 Mimmics 及陰性對照 NC。
三、 實驗分組信息
四、 預期實驗結果
