評價疫苗有效性的金標準T細胞和B細胞ELISPOT技術

事實：能使人生病的細菌、病毒等病原體幾乎無處不在，我們的身體無時無刻不處在病原體的包圍之中，但是通常情況下，我們并沒有感到不適。這是因為我們有著強大的免疫系統。

人體的免疫系統是一個復雜又神奇的存在，既能幫助人體有效抵御病原體的侵害，又能維持平衡不攻擊正常的人體細胞，人體免疫包括非特異性免疫和特異性免疫，其中特異性免疫簡單來說又分為體液免疫（B 細胞主導，通過分泌抗體來起作用）和細胞免疫（T細胞主導，通過分泌細胞因子來起作用）。在免疫反應中，CD4+T細胞具有激活B細胞和CD8+T細胞的功能，B細胞主要產生中和抗體，而CD8+T細胞主要在細胞免疫中通過分泌細胞因子來起作用，并產生記憶B細胞和記憶T細胞。機體產生的中和抗體主要抑制病毒的進一步感染，細胞免疫則主要對抗臨床癥狀。

疫苗即是通過誘導體液免疫和細胞免疫達到預防相應傳染病的目的。因此，中和抗體和細胞免疫也是病毒疫苗有效性評價中非常重要的指標。那么哪種方法可以評估疫苗引起的體液免疫和細胞免疫呢？ELISPOT可以給你答案：

酶聯免疫斑點檢測（Enzyme-linked Immunospot Assay，ELISPOT）是將細胞培養技術和ELISA技術相結合，可以原位地檢測培養細胞體外分泌蛋白的高靈敏分析技術。根據技術原理，主要分為T細胞與B細胞ELISpot兩種。其中T細胞ELISpot主要用于檢測刺激后細胞所分泌的痕量細胞因子，而B細胞ELISpot主要用于檢測抗體分泌B細胞的頻率。

A：將特異性抗原包被在培養孔底部捕獲IgG，用生物素偶聯的抗體進行檢測；

B：使用抗IgG的抗體進行包被，用生物素偶聯的抗原進行檢測；

C：總的IgG的檢測方法：使用抗IgG的抗體進行包被，再使用生物素偶聯的抗體進行檢測。

B細胞ELISpot用于研究抗體分泌細胞的應答反應，主要包括感染后以及疫苗接種后應答反應的研究。目前，B細胞ELISpot是僅有幾個能夠直接關注抗體分泌細胞（ASCs）的檢測工具之一，而其他的分析方法多為檢測液體中游離的抗體。相比于其他檢測方法，研究人員借助B細胞ELISpot可以更準確地識別出樣本中的ASCs，并測定出其數量及針對特異性抗原分泌的抗體數量。

T細胞的ELISpot

將特定指標的抗體包被在培養孔底部捕獲對應細胞因子，用生物素偶聯的抗體進行檢測

T細胞ELISpot廣泛應用于細胞介導的免疫應答研究，如傳染性疾病，癌癥，過敏癥以及自身免疫性疾病的研究中，并且T細胞ELISpot也被視為為檢測和評價疫苗 有利的研究工具之一。在疫苗治療前后，如何準確的定性，定量判斷抗原特異性T細胞反應，評價療效是疫苗發展的關鍵。例如，Th1細胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，Th2細胞主要分泌IL-4，IL-5以及IL-13。借助ELISpot測定疫苗治療前后T細胞應答反應的細胞因子表達量變化來進行疫苗評價。

ELISPOT技術優勢

① 靈敏度高。在一百萬個陰性細胞中只要有一個分泌細胞因子的陽性細胞即可被檢測出來。這是目前為止，最為靈敏的檢測技術，靈敏度比傳統的ELISA方法高2-3個數量級。

② 單細胞水平。ELISpot檢測的是單個細胞分泌，而非細胞群體的平均分泌。

③ 功能學檢測。ELISpot檢測到的細胞因子不是在細胞正常狀態下就存在的，而是在檢測的過程中活細胞收到刺激物的刺激后分泌出來的。斑點的強弱和數量直接反映了細胞對刺激物的反應能力和分泌細胞因子的能力。

④ 直觀、可信度高。結果直觀，一個陽性細胞對應一個斑點。

Mabtech公司提供的B細胞ELISpot檢測指標包括人，非人靈長類，小鼠，牛、豬等種屬的IgG，IgA，IgM以及IgE，下表僅列出人的做為參考，其他種屬的B細胞ELISpot檢測指標，詳詢艾美捷科技。

當然， Mabtech作為ELISpot、FluoroSpot和ELISA等免疫學相關研究的領導者，除了可以提供以上B細胞ELISpot檢測指標，還可提供最全的T細胞ELISpot檢測指標: 白細胞介素IL（扒一扒白細胞介素（Interleukin）的家族秘密）、腫瘤壞死因子TNF（Mabtech腫瘤壞死因子-α的產品大集合啦）、干擾素IFN（IFN-γ ELISpot法：有效評估疫苗引起的細胞免疫效應）等。