在新冠病毒2019-nCoV的分子生物學研究中,電泳技術是一個重要的方法,主要用于核酸、蛋白質的分離與鑒定,使用的實驗儀器主要是電泳儀。本文,樂楓純水為大家總結了實驗中常出現的問題和解決方法。
什么是核酸電泳?
核酸電泳是基因操作的核心技術之一,用于分離、鑒定DNA、RNA 分子混合物和純化DNA片段。
核酸電泳最讓大家頭疼的問題 - 異常條帶
核酸電泳實驗中,常常會遇到條帶模糊、拖尾、扭曲等現象,究其原因,除了操作不當,電泳條件未優化,電泳緩沖液也是重要的影響因素之一。電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。
緩沖液離子強度低,電導率小,導致DNA遷移緩慢;如果多次使用,離子強度降低,PH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果。
緩沖液離子強度高,則電導率高并明顯產熱,嚴重時會引起凝膠熔化或DNA變性。
表1 核酸電泳條帶異常原因匯總及建議的解決方法
常見問題 | 原因 | 解決方法 |
條帶模糊 | 核酸降解 | 使用不含核酸酶的超純水配置緩沖液 |
電泳緩沖液陳舊 | 建議經常更換緩沖液 | |
有蛋白污染 | 使用低有機物的超純水配置緩沖液 | |
核酸變性 | 使用超純水或者緩沖液稀釋樣品 | |
條帶黯淡 | 核酸濃度過低 | 增加上樣量 |
核酸降解? | 使用不含核酸酶的超純水配置緩沖液 | |
條帶被示蹤染料掩蓋 | 提高上樣量;避免使用與目的片段遷移率相同的示蹤染料? | |
拖帶或涂抹帶 | PCR體系或PCR程序不合適 | 優化PCR體系和PCR程序 |
條帶扭曲 | 配膠的緩沖液和電泳緩沖液不同 | 配膠和電泳中使用同一批緩沖液 |
電泳時電壓過高 | 控制電泳時電壓不超過6V/CM |
核酸電泳用純水要求
為了防止水中雜質(如:核酸酶、蛋白質、離子等)對電泳結果的影響,核酸電泳實驗配置緩沖溶液或稀釋樣品需要使用超純水:
電阻率 18.2 MΩ·cm
TOC < 10 ppb
無核酸酶和蛋白酶
細菌總數< 1 CFU/mL
熱原< 0.005 EU/mL
0.22μm 或更低的顆粒過濾
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