2．分子標志物
分子標志物思路案例1
外泌體分子標志物的研究是在表達譜的基礎上進行更進一步的分析和篩選，并且通過擴大樣本驗證，來確認可以作為標志物的分子。這類研究與臨床應用聯系更緊密，近年來越來越受重視。2019年發表在Molecular Cancer（IF=10.679）上的文章Tumor-originated exosomal lncUEGC1 as a circulating biomarker for early-stage gastric cancer， 文章思路如下圖：
作者分別從健康人（HC）和胃癌患者(GC)的血漿，培養的人胃上皮細胞(HPSEC)和胃癌細胞(GCC)中提取外泌體進行了鑒定，然后通過對lncRNA測序（云序提供此項服務），從差異外泌體中篩選出了lncUEGC1并用qPCR進行了驗證。最后，再擴大了樣本檢測, 通過ROC曲線分析證明了lncUEGC1有希望作為高效穩定的早期胃癌的分子標志物。
分子標志物思路案例2
發表在Clin Cancer Res （IF=10.199）上的Evaluation
of tumor-derived exosomal miRNA as potential diagnostic biomarkers for
early stage non-small-cell lung cancer using next-generation
sequencing，其文章研究思路如下圖：
作者對46名非小細胞肺癌I期患者（其中惡性腺瘤26人，鱗狀細胞癌20人）和健康人血漿中的外泌體進行提取和鑒定，通過miRNA-seq （云序提供此項服務）和qPCR，篩選并驗證了4個只在惡性腺瘤外泌體中表達改變的miRNA，3個只在鱗狀細胞癌外泌體中表達改變的miRNA，以及4個在兩種細胞的外泌體中都表達改變的miRNA。最后擴大樣本，在60個患者中檢測驗證了患者體內miRNA組合與疾病診斷的準確性。這項研究篩選出了有望成為高敏感度、非侵入性檢驗早期非小細胞肺癌的分子標志物的外泌體miRNA。
3．分子機制
由于外泌體重要功能是細胞間的交流，其內攜帶的分子又種類繁多，研究揭示的外泌體影響的生物功能也是十分廣泛，涉及到哺乳動物的生殖和發育，免疫系統和感染，代謝和心血管疾病，神經退行性變以及癌癥腫瘤。研究外泌體在這些過程中的作用影響，以及經過哪些具體的通路，發表文章的周期會較長，但是相對的，影響因子也高，很多都在10分以上。
分子機制案例
2020年發表在The Journal of Clinical Investigation （IF=12.282）上的Exosomal
long noncoding RNA LNMAT2 promotes lymphatic metastasis in bladder
cancer， 揭示了外泌體lncRNA介導的淋巴轉移機制，并將LNMAT2作為膀胱癌淋巴轉移的治療靶點。下面我們來看一下文章的研究思路：
作者首先通過LncRNA-seq（云序提供此項服務）篩選了在淋巴轉移的膀胱癌中上調的LNMAT2，并驗證了LNMAT2過表達使膀胱癌病人生存率降低。然后，原位雜交實驗將LNMAT2與膀胱癌外泌體聯系在一起，并通過提取鑒定外泌和qPCR進行了確認。接著，通過體外共孵育和體內實驗證明了上調LNMAT2能促進淋巴生成。最后為了探究LNMAT2作用的分子機制，巧妙利用了RNA pull -down+MS/WB、RIP、ChIP以及雙熒光素酶報告實驗等方法，發現并證實了hnRNPA2B1介導LNMAT2進入膀胱癌外泌體中，外泌體LNMAT2被人淋巴管內皮細胞攝取內化后，通過募集hnRNPA2B1和增加PROX1啟動子上的H3K4三甲基化水平，進一步上調PROX1表達，最終導致淋巴管生成和淋巴轉移。
