為了支持新型冠狀病毒（COVID-19）的檢測及疫苗研發工作，美國疾病預防控制中心（CDC）和中國政府都已完成了新型冠狀病毒基因組的測序并將結果提交至US NCBI GenBank? 數據庫[1]。近日，IDT收到了來自世界各地研究人員關于新型冠狀病毒檢測試劑盒的詢問，以下是部分簡要說明。
美國疾病預防控制中心
美國疾病預防控制中心檢測試劑盒* 靶向COVID-19核衣殼蛋白基因（N-基因）上的不同位點。該試劑盒中的3組引物/探針必須與靶向人RNase P基因的內部對照同時運行。每個患者樣本共需進行4次qPCR檢測。
1. 該檢測試劑盒采用一步法qPCR反應（即逆轉錄和后續qPCR反應在同一步驟中完成）；
2. 所有3次N-基因檢測只有在Cq <35時方可視為陽性結果；
3. RNase P內部對照反應是關鍵。Cq >35表示樣本提取不佳，需要重復實驗；
敬請查閱最新的美國疾病預防控制中心 COVID-19 RT-PCR檢測方法實驗室指南，獲取相關文檔及實驗方案。
與其他檢測試劑盒的比較
世界衛生組織（WHO）
世界衛生組織實驗方案不同于美國疾病預防控制中心實驗方案。世界衛生組織建議需進行3次qPCR反應來確認是否感染COVID-19。盡管這是一套完整的實驗方案，但沒有美國疾病預防控制中心檢測方法來得快，因為它需要連續進行3次檢測，且必須觀察到陽性結果才能進行下一次檢測。該實驗方案按如下順序進行檢測：
1. 冠狀病毒E-基因
2. RdRP基因：針對SARS 冠狀病毒和其他蝙蝠相關冠狀病毒
3. RdRP基因：針對COVID-19
中國疾病預防控制中心
中國疾病預防控制中心檢測試劑盒建議采用2組引物/探針。第1組靶向ORF 1ab，第2組用于確認COVID-19的N-基因。
對照組
初步的電子模擬分析表明，搭配使用 IDT
N-基因陽性對照組模板**與美國疾病預防控制中心檢測試劑盒，與使用中國疾病預防控制中心、泰國衛生部以及HKU的引物/探針組進行類似實驗獲得的結果相符。當然，這是基于電子模擬研究，建議用戶在自己的實驗室中對所選試劑盒進行驗證。
參考文獻
1. (2020) 2019 Novel Coronavirus (2019-nCoV), Wuhan, China. [Online] US
Centers for Disease Control and Prevention. [Accessed 28 Jan 2020].
* IDT并非、也未聲稱是美國疾病預防控制中心冠狀病毒引物探針序列的主要、首選或推薦供應商。IDT可獨立提供CDC公布的用于冠狀病毒檢測的引物和探針序列，訂購非常方便。
** IDT對照并非由CDC設計、檢測和驗證，也未得到CDC或其他公共衛生機構的認可。這些對照由IDT單獨設計，針對SARS、MERS和COVID-19的核衣殼蛋白全基因，是為了方便客戶而提供的。如果用于解釋檢測結果，最終用戶應進行對照驗證。
用于2019新型冠狀病毒（COVID-19）檢測的IDT試劑
COVID-19 qPCR探針
IDT可提供美國疾病預防控制中心* 設計的4次COVID-19檢測試劑盒，用于病毒鑒定。3次檢測靶向COVID-19核衣殼蛋白基因（N-基因）上的不同位點。第4次內部對照檢測靶向人RNase P基因，必須同時運行。
該試劑盒遵循ISO 13485:2016標準生產，其中包含引物和5’ FAM / 3’ Black Hole Quencher? (BHQ) 探針，溶于IDTE (pH 7.5) 中，并于1–2個工作日內發貨，在常溫下進行運輸。
COVID-19質粒對照組
IDT還可提供COVID-19對照質粒**，其中包括COVID-19、SARS或MERS的核衣殼蛋白全基因。COVID-19 CDC
qPCR探針靶向nCoV核衣殼蛋白基因區域，該基因存在于COVID-19_N陽性對照質粒中。Hs_RPP30陽性對照試劑盒包含一部分RPP30基因，它是人類基因組中的單拷貝基因。對照質粒溶于250 μL（200,000個拷貝/μL）的IDTE（pH 8.0）中，并于1–2個工作日內發貨，在常溫下進行運輸。
