類風濕關節炎(rheumataid arthritis，RA)是一種以慢性關節炎為特征的系統性自身免疫性疾病，該病如不及時診斷治療，即可出現軟骨和骨的侵蝕性病變，造成關節結構破壞，最終發展成為關節畸形、強直，導致不同程度的殘疾，因此早期診斷至關重要。但是，目前的診斷均依據1987年美國風濕協會修訂的RA分類診斷標準，其中臨床實驗室診斷最常用的是檢查血清中的類風濕因子(rheumatoid factor，RF)，由于RF受某些抗原、抗體物質的干擾，常出現假陽性，特異性不高，常常只能根據臨床癥狀和x線表現診斷，從而導致誤診和漏診，因此人們一直在尋找特異、敏感的實驗室指標以助診斷。
2000年Schellekens等以合成的環瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide，CCP)作為底物用ELISA方法檢測RA血清中的抗體，發現此抗體對RA具有很高的特異性和敏感性，可用于RA的診斷。抗CCP抗體的檢測為RA的早期診斷提供了較好的血清學指標，目前國內正在逐漸開展臨床應用。
◆抗環瓜氨酸肽抗體的生物學特性
抗環瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide，CCP)抗體是環狀聚絲蛋白的多肽片段，是以IgG型為主的抗體，由類風濕關節炎(rheumatoidarthritis，RA)患者B淋巴細胞分泌的特異性較高的抗體，其他疾病和正常人群的B淋巴細胞不分泌抗CCP抗體。
瓜氨酸相關自身免疫系統指RA患者血清中的一些抗體在化學結構上具有相關性，即表位均含有瓜氨酸，該系統在RA的早期診斷中發揮關鍵作用，抗CCP抗體就是其中重要的一種。瓜氨酸是人體中的稀有氨基酸，由精氨酸在轉錄后經酶修飾生成，僅存在于人類的少數幾種蛋白中，包括絲集蛋白、中間絲集蛋白。在細胞分化過程中，口腔黏膜上皮細胞角質顆粒中的絲集蛋白前體被酶分解成絲集蛋白亞單位，同時，蛋白去磷酸化，精氨酸在多肽精氨酸脫亞氨酶(peptidyl arginine deiminase，PAD)的催化下脫氨基而轉化成瓜氨酸殘基，瓜氨酸殘基是抗原決定簇的必要成分，能被RA血清特異性識別。但是，由于它以人的口腔黏膜上皮細胞為反應底物，不易選擇合適的人群。
1998年Schellkens等和1999年Girbal-Neuhauser等根據基因庫中各序列號絲集蛋白的氨基酸序列進行分析，合成了一條以瓜氨酸代替精氨酸的約20個氨基酸殘基的肽鏈，并證實瓜氨酸是RA患者血清中抗絲集蛋白相關抗體識別的主要抗原決定簇成分。應用合成的瓜氨酸肽作為基質，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)可自RA早期患者的血清中檢出抗瓜氨酸肽抗體，甚至在臨床癥狀出現前就可檢測到。但是，由于瓜氨酸肽的肽鏈較短，在溶液中的構象欠穩定，影響抗體對肽的親和力。因此，應用β轉角構象的肽鏈易與抗體結合的原理，形成了以環化肽模仿最初抗原決定簇β-轉角構象的研究理念，以提高其對抗體的親和力。2000年，Schelleken等以半胱氨酸替換由19個氨基酸殘基組成瓜氨酸肽鏈中的2個絲氨酸，形成與β-轉角構象具有相似結構的二硫鍵，合成CCP。采用CCP為抗原基質，采用ELISA法檢測RA患者血清中的抗CCP抗體，為RA的早期免疫學診斷建立了有效方法。
◆抗環瓜氨酸肽抗體檢測的臨床價值
RA是致畸率高、后果嚴重、常見的自身免疫病，全世界約1％的人群患本病，發病2年內即可出現不可逆的骨關節損傷，并可引起心血管、神經等多系統損害，給患者帶來極大痛苦，也給社會造成沉重的負擔，早期診斷及治療是控制病情的關鍵。現行的實驗室診斷主要靠檢測RF，但3％～5％的正常人群可以檢測到RF，在結締組織病、感染、腫瘤等疾病中RF也可為陽性，而近年問世的抗CCP抗體的檢測給RA的早期診斷帶來了希望。
目前，國外的抗CCP抗體對RA的檢測已普遍用于臨床，國內自2001年以來也逐步應用于臨床。文獻顯示，抗CCP抗體的特異性多在94％以上，敏感性為41％～87％。可見抗CCP抗體檢測對RA的診斷具有較高的特異度，與目前通用的RA分類標準中唯一的血清學診斷指標RF(敏感性高但特異性差)相比，具有明顯的優勢。而且對供血員的連續檢測表明，抗CCP抗體的檢出可以比臨床癥狀的出現提前數年，可見這一新的血清學診斷指標對RA的早期診斷具有重要的意義，值得推廣，以早期治療患者，降低致殘率。
多數研究資料表明，抗CCP抗體陽性反映病情活動，與關節發生侵蝕性病變具有密切關系，這也符合CCP抗原抗體復合物作為RA發病重要環節的病理生理理論。有學者對數百例RA患者進行1～6年的隨訪，通過影像學評分的連續觀察指出，抗CCP抗體陽性患者較陰性患者更易發展成影像學可見的關節損害，也就是說，抗CCP抗體陽性患者發展為侵襲性疾病的可能性更大。研究還發現，抗CCP抗體與C反應蛋白及紅細胞沉降率升高一樣，在RA活動期也較非活動期顯著升高，而RF在活動期與非活動期的差異不明顯，說明抗CCP抗體比RF更能反映RA的病情變化，且變化趨勢與C反應蛋白水平及紅細胞沉降率一致，故可作為判斷病情變化趨勢及評價治療效果的指標，對臨床選擇用藥有一定的指導意義。
Jansen AL等通過不同類型的多關節疾病患者血清中抗CCP抗體的測定，預測了抗CCP抗體大于50AU/ml即可對早期類風濕性關節炎有較高的敏感性和特異性。Bizzaro N等檢測了RA患者抗CCP抗體的水平，結果也同樣顯示了抗CCP抗體的臨界值為50AU/ml。并且RA患者清血清中抗CCP抗體的平均水平為1100AU/ml（范圍為：57～3419AU/ml）。而對照組抗CCP抗體的平均水平僅為6.8AU/ml（范圍為：1～39AU/ml）。進一步證實了抗CCP抗體對RA患者的診斷價值。
抗CCP抗體檢測在判斷病情與預后中作用的不同結果，可能與病例選擇、樣本量、判斷陽性標準及病變程度不同有關，其在判斷預后中的價值有待進一步觀察。敏感度結果差距較大的原因可能與試劑本身的因素、抗CCP抗體存在的異質性以及選擇病例的病程長短和骨質破壞程度的不同有關。
◆抗環瓜氨酸肽抗體的檢測方法
目前國內外市場上的抗環瓜氨酸肽抗體檢測試劑盒主要應用酶聯免疫吸附法（ELISA法），它采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，其所生成的顏色深淺與欲測的抗原（抗體）含量成正比，可定性或定量檢測患者血清中抗CCP抗體。其特異性來自抗體或抗原的選擇性，抗原抗體的結合實質上只發生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間，由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系，所以抗原抗體反應具有高度的特異性。ELISA法檢測具有特異性高、價格低廉的優點，但是一般采用手工操作，操作繁瑣效率低，且人為影響因素大，結果只能定性或不精確地定量。因此，在這高效率的自動化時代，特異性高、操作簡便的全自動化檢測方法必將有良好的市場前景。目前國內已有體外診斷試劑公司開發出采用 “膠乳增強免疫比濁法”檢測的抗環瓜氨酸肽抗體試劑盒，并已投入臨床應用。
免疫比濁法（Immunoturbidimetric Assays）是抗原抗體結合動態測定方法。其基本原理是：當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應而且比例合適(一般規定抗體過量)時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現濁度。當抗體濃度固定時，形成的免疫復合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應液的濁度也隨之增加，通過測定反應液的濁度與一系列標準品對照，即可計算出檢樣中抗原的含量。而“膠乳增強免疫比濁法”是將待測物質相對應的抗體或抗原包被在直徑為15－60nm的膠乳顆粒上，使抗原抗體結合物的體積增大，光通過之后，透射光和散射光的強度變化更為顯著，從而在免疫比濁法的基礎上提高試驗的敏感性。相對于“ELISA法”，“膠乳增強免疫比濁法”操作簡單，抗干擾性更強，且可測線性范圍也更寬，能利用普通的生化分析儀進行檢測，容易實現自動化，可在各級基層醫療機構普及和應用。
◆研究展望
幾年來國內外的臨床檢驗實踐表明，抗CCP抗體是檢測RA較好的血清學指標，具有高度的特異性和一定的預后價值，被公認是RA的一個有價值的診斷指標，對判斷病程也有參考意義。因此，不少學者提出修正1987年美國風濕協會修訂的RA分類診斷標準，增加抗CCP抗體作為第8個標準，以更好地早期診斷RA，這也反映出抗CCP抗體檢測的廣闊應用前景。今后抗CCP抗體診斷RA的研究目標是提高敏感度，甚至達到100％，解決途徑是應用多細胞系的強化抗原決定簇，多個肽的診斷效率更高。
此外，多種檢測指標聯合應用也有利于RA的診斷。有研究者認為，抗CCP與RF聯合檢測可顯著提高RA的診斷率，對早期診斷和盡早治療、改善預后有較高價值。在檢測中,二者聯合檢測的陽性率,較任何只作單項檢測均有統計學意義(P<0.01)；另外,二者聯合檢測可以為臨床提供更多的信息,如疾病的活動性、病情的嚴重程度、指導臨床用藥等。
