3.4 評價時間分辨熒光技術的不足為測量方式復雜、儀器成本及維護費用高,環境及樣品中同類元素可導致本底干擾等。
3.5 代表儀器法國CIS公司1996年在歐洲推出KRYPTOR全自動時間分辨熒光免疫分析系統,用三價鑭系元素銪(Eu3+)與磷酸三丁酯劑量 校準曲線。近年來,該系統已可供臨床實驗室應用的試劑盒有腫瘤標志物、唐氏癥篩查指標、性功能激素檢查、心血管疾病、骨代謝、甲狀腺自身免疫性疾病等。TRFlA可做雙標記和多標記分析,美國PE公司的1420Victor多標記免疫分析系統集時間分辨免疫熒光分析、化學發光免疫分析、熒光分析及酶聯免疫吸附分析于一機,實現一次反應多項結果,1臺儀器多種功能。
4、生物發光
4.1 生物發光是生物體內發光蛋白通過消耗能量物質而產生的發光現象,其特點為只消耗能量物質,不消耗發光物質。近年來,隨著越來越多的發光蛋白被提純、其編碼基因序列被測定、表達,其發光底物被人工合成,相關的基礎研究和產品的商業化進展迅速。已經發現的發光蛋白包括細菌熒光素酶、蟲熒光素酶、腰鞭毛蟲、熒光索酶水母素及奧貝林綠色熒光蛋白等,類似的熒光蛋白還有橙色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、藍綠熒光蛋白等。另外,目前己經被發現的生物發光底物有:蟲熒光素、腔腸素、還原型黃素單核苷酸、腰鞭毛蟲熒光素、種蝦索等。
4.2 生物發光免疫分析法是采用生物發光物質,如蟲熒光素酶或細菌熒光素酶或者轉助因子(NAD+、三磷酸腺苷等)進行標記抗原抗體,使其直接或間接發光反應進行檢測。如Wannlund等在1980、1982年用熒光素酶進行標記,發光免疫分析測定氨甲蝶呤和細菌熒光素酶,Terouanne在1986年采用6一磷酸葡萄糖脫氨酶標記孕酮進行發光免疫分析血清中孕酮。
4.3 生物發光免疫分析法在生物醫學領域內的應用主要包括細胞學、分子生物學、衛生學、生物傳感器、脂質過氧化檢測和藥物篩選等6個方面。其中細胞學檢測主要是利用細胞內ATP導致的蟲熒光索酶生物發光進行活細胞計數,目前已實現快速、動態,單細胞分析。近年來,在該領域內的應用研究又有一些進展,例如用于測定T細胞免疫活性等,同時也發現了一些新的與生物或化學發光有關的細胞學指標。分子生物學領域內的應用主要為報告基因和分子雜交,近年來又有人推出了生物發光實時DNA測序技術。衛生學檢測則主要是利用分子雜交或ATP導致的生物發光檢測微生物污染,有人將該技術用于尿樣中的細菌總數快速測定,可在1h內完成的快速藥敏試驗方法。基于生物及化學發光的生物傳感器主要有三類:酶固化傳感器、免疫分子傳感器和特異調控因子誘導的報告基因傳感器。脂質過氧化檢測主要是指利用化學發光檢測自由基等活性物質。最近還有人分別推出了基于報告基因和細胞增殖的生物發光藥物篩選系統。
5、激光免疫分析
作為激光技術在醫學診斷學的新應用,美標公司醫學集團DiaSorin已研究開發了COPALIS多項檢測系統。國內首次見到該系統是在1998年5月的全軍后勤裝備展覽會上,接著6月的Sino-Med也展示了該系統。COPALIS即耦聯顆粒光散射技術,其耦聯顆粒是由抗原一抗體、受體一激素或核酸的相互作用,在聚苯乙烯微顆粒存在下,或自身聚集,或與膠態金顆粒聚集,形成單一的和/或聚集的均相配體顆粒。當它們逐個流過一個由半導體激光形成且精確聚焦的入射光束時,會產生一個散射光脈沖,信號被光電二極管探測器記錄下來,直行的激光光束則被探測器上的中央光束隔柵阻斷。該系統一次可同時自動檢測4種不同的分析指標,如弓形體、風疹、巨細胞和非洲淋巴細胞瘤病毒等,12 min內報告全部結果。第5個通道用來放置內部參照物,作為系統的質控檢查,以確保準確性和可靠性。目前,DiaSorin正在開發可以同時檢測6項指標 的第2代產品,將提供從出生前的圍生醫學到老年醫學貫穿整個生命周期的健康服務。