大家總會提出為什么測定會出現負值的問題,我從儀器角度解釋一下測定數據是如何計算出來的,如果大家能熟悉這一計算過程,對于出 現負值的原因查找會有幫助。咱就以2點終點法為例子吧
首先是吸光度度的計算,下圖給出的是一個尿酸標本測定曲線,其中黑色圈內的測光點是我們計算用的,分別是15點與16點的吸光度 均值A1、33點與34點的吸光度均值A2。其公式為
A=A2 - K * A1
其中K為液量修正系數,其計算方法為
K= (S + R1)/ (S + R1 + R2) S是標本量、R1、R2分別是試劑一、二的量
這時我們得到吸光度A值后,開始濃度的計算
濃度C =[K * ( A — B) + C1]* IFA + IFB
其中B是S1ABS吸光度,也就是空白或第一標準液的吸光度,
C1是空白或是第一標準液濃度,
K是K系數,也就是下圖中所做標準曲線的斜率(圖中已標出)
IFA、IFB都是儀器常數,在一般情況下IFA=1,IFB=0,C1=0,所以該公式可以簡化成C = K *(A — B)
K系數的計算是通過儀器測定S1(標準液1)、S2(標準液2)的A值以及給定的濃度來計算的。
通過以上計算我們可以知道結果為負值有兩個環節可能出現,一是A2—K*A1時,第二是A — B(空白吸光度)時,前一種情況說明試劑質量完全失效,應更換,但是日常出現這樣情況非常少見,而第二種情況是最多見的,所以為 什么總是推薦大家每天做空白校正,就是這個原因。每天的試劑都在變化,試劑空白吸光度也在變化,這樣既可以預防試劑過期,也可以 減少被測物含量很低的標本出現負值的幾率。
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