自1935年Quick創建凝血酶原時間（prothrombin
time,PT）測定方法以來，迄今仍然
是檢查外源凝血系統諸因子及相關抑制物的重要篩選試驗，PT也是目前口服抗凝劑治療的主要手段。但是，PT測定受多種因素影響，
必須對它進行標準化和質量控制，以提高PT檢測的精密度、準確度和可靠性。
（一）凝血酶原時間（PT）的標準化問題
1、組織凝血活酶標準化：應用的國際參考品（international reference preparation IRP），有下列幾種：
（1）單一組織凝血活酶國際參考品：是一種組織提取物的生理鹽水懸液制劑。WHO在英國使用的統一標準的"英國比較凝血活酶"（
British comparative thromboplastin,BCT）為基礎，制備WHO的原級凝血活酶參考品（primary
reference preparation），如人腦組織凝血活酶，編號67/40。同時又以BCT67/40為基礎標化了次級參考品（secon
dary reference
preparation）。如牛腦組織凝血活酶，編號為68/434；兔腦為70/178。后來WHO還公布了一些次級組織凝血
活酶參考品，如人腦或胎盤制劑，如BCT/253；兔或兔、猴組織混合制劑，如RBT/79等。
（2）復合組織凝血活酶國際參考品：它是組織提取物的生理鹽水懸液中加入適量的纖維蛋白原、因子V 和氯化鈣組成的制劑，如牛組織凝血活酶OBT/79等。
目前世界各國都廣泛應用WHO的這些參考品來校正本國或本地區制備或生產的組織凝血活酶參考物。這樣使世界范圍內有了多種組 織凝血活酶參考品。
2、組織凝血活酶工作制劑（working preparation,WP）的國際敏感度指數（international sensitivity index,ISI）
由于不同組織凝血活酶對凝血因子的敏感性不同。為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測PT中能得到同樣的結果，必須要制定一 個共同的敏感性指標。這就需要通過自制的試劑與國際參考品（IRP）進行比較，然后得出一個校正值。具體的方法如下：
（1）用國際參考品（IRP）標定國家、地區或本實驗室的參考制劑（reference preparation,RP）。
（2）用實驗室參考制劑（RP）標定工作制劑（WP）。
1）標本：2份正常人血漿和6份口服抗凝劑達6周的患者血漿，連收10天，共60份標本。
2）測定：按一定順序進行測定，每份標本重復測定2次。將PT測定的結果（秒）點在雙 對數坐標紙上，橫坐標代表WP的PT測定結果，縱坐標代表RP的PT測定結果，畫出最佳的各點擬合直線，得出定標曲線，通過WP /RP比值，或回歸方程求出斜率b。
3）計算WP的ISI值：ISI值愈接近于1.0，表明組織凝血活酶試劑愈敏感，因此，生產和出售組織凝血活酶試劑的廠商，必須 在產品上標有ISI。
3、PT測定結果的報告方式：理論上，無論何種組織凝血活酶，只要標有ISI，就可與國際參考制品進行對比校正，并可用同一種計 量單位報告。1985年ICSH和ICTH推薦以PT監測口服抗凝劑的報告方式是國際正常化比率（international normalizde ratio,INR）。
INR的計算公式如下： 在用INR后，各種敏感性不同的組織凝血活酶均可得到相同的INR值。
4、儀器特有有ISI：上述PT根據報告方式適用于手工法（試管傾斜法）測定PT。但是手工法與儀器法以及儀器法與儀器法測定P T的INR之間，仍有差異。研究表明，在ACL、Cobas Fibro和Coaga-Pet三臺自動化儀器上，使用同一種ISI為1.12的Thromborel S試劑，測定PT的均值分別為10.7秒、12.1秒和11.1秒。但若以同一ISI值計算INR，得出的數值也存在著不同程度 的差異。為此，專家們提出建議：同一組織凝血活酶試劑用于不同儀器時，可用所謂的"儀器特有的ISI"（instrument specific ISIs）或稱區域性ISI（Local ISI）來計算INR。每臺儀器所使用的凝血活酶試劑都應該有特定的ISI值，重新標定ISI值的做法是購買標有INR的凍干血 漿，然后在自己的儀器上再標定所使用凝血活酶試劑的ISI值，這樣才可使病人的INR具有可比性。
（二）凝血酶原時間（PT）的推薦方法
[原理]
將組織凝血活酶（主要含組織因子和脂質）和鈣離子，加到枸櫞酸抗凝血漿中，在37℃保溫，測定血漿凝固時間，即為PT。PT 主要用于篩選檢測外源凝血系統的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相關因子的抑制物的試驗。
[標本來集和處理]
1、標本采集：用硅化或塑料注射器抽取空腹靜脈血，按9:1比例加入含0.109mol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑的硅化或塑料試管中 ，輕輕混合均勻。
2、標本處理：以2000～2500g，離心15分鐘，分離乏血小板血漿，并在24小時內完成試驗。
3、正常對照血漿：選擇正常健康男性和女性各lO名以上，年齡在18～45歲。但不能是妊娠、月經期、哺乳期和口服避孕藥的婦女 ，采取的血漿冰凍干燥保存或-80℃保存。
[試劑]
1、抗凝劑：109mmol/L枸櫞酸鈉液（相當于含二分子結晶水的枸櫞酸鈉32g/L）。
2、凝血活酶試劑：市售商品，應標有ISI、批號及有效期。凍干者應按說明書加指定的緩沖稀釋劑復溶。
3、氯化鈣（CaCl2）溶液：為25mmol/L。（目前有些商品試劑已將凝血活酶液與氯化鈣液混合好，可不必另配CaCl2 液）。
4、質控物：正常及異常對照血漿
5、配制試劑用水必須符合1級純水的標準。
[儀器]
1、手工法：秒表，保持37℃±1℃的恒溫水浴箱或電熱塊。水深能浸試管3cm以上，表面無劃痕的10×mm拭管。經標準的0. 1mL移液管。經校正的秒表。
2、儀器法：各種自動或半自動血凝儀，嚴格按說明書操作。
[操作步驟]
1、手工法
（1）測定溫度36.5～38.5℃，上述各試劑及被測血漿，均應預溫至此一溫度，但凝血活酶試劑預溫不可超過30分鐘，血漿預 溫一般不宜超過10分鐘。
（2）所用試管及加樣器等接觸血漿的器具均為塑料或硅化玻璃管。
（3）吸取枸櫞酸抗凝血漿0.1mL，加入一小試管中：加入凝血活酶試劑0.1mL混勻后置37℃水浴中。再加入25mmol/ L CaCl2液0.1mL，（也可先將凝血活酶試劑與CaCl2溶液等量混合，加入0.2mL）。立即混勻并開動秒表：試管仍浸于 水浴中，至約10秒鐘時，自水浴中取出，在紗布上迅速擦去試管外水滴，在明亮處不斷傾斜試管，在流動狀態下觀察有無纖維蛋白形成 。一旦見到纖維蛋白（同時將出現液體流動減慢），立即停表，記錄時間。每次測定二管，按平均數報告。本試驗的最后混合液其pH應 為7.2～7.3，大部分商品凝血活酶試劑均用含緩沖液的溶液配制。
（4）每批均同時做正常和異常對照，方法應與測定標本完全相同。
[報告方式]
1、以PT的秒（S）數報告（最接近的0.5秒）
2、以患者血漿（S）/正常對照PT（S）的比率（PRT）報告。
3、在口服華法令類抗凝藥物治療監控時，應報告國際正常化比率（INR）。大部分自動化儀器可根據所測的PTR和凝血活酶試劑的 ISI，自動算出INR。手工法可根據下列公式，用一計算器直接計算：
INR計算公式為：INR=PTRISI 或INR=antilog（ISI×lgPTR）
PTR為所測PT的比值，ISI為其冪指數，即PTR的ISI次方所得數值為INR。
Poller設計了一個簡便的列線圖，在取得PTR和ISI值后，即可從圖上直接查找出INR值，十分便利，國內已有介紹。
ICSH規定，不再用稀釋曲線或百分比（活動度）報告。
[參考值]
因儀器/試劑不同，會得出不同結果，故很難統一規定參考值。各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件，自行測定一批健康人，建
立參考值。此后至少每年或當條件有變化時，根據新的條件，重新建立。參考值PT測定的一切條件均應與患者血漿PT測定相同（包括
采血、容器、抗凝劑等）。健康供血者應選至少20個18～55歲的男性和非妊娠、月經期女性，不可服藥，在平靜休息狀態采血、以
減少個體差異（有條件時，可測一批老年人和小兒，分開統計）。同時應分開幾天采血和測定，以減少天間差異。測定結果經統計學處理
，計算標準差：以兩個標準差（2SD）或95%可信限作為參考范圍。對于三個標準差是正常還是異常，需結合具體情況進行評估。從
統計學上講，其中有些人是正常的。用以上標準，病人（PT異常）則很少會遺漏。
【臨床意義】
凝血酶原時間延長見于：凝血酶原、V、Ⅶ、X因子缺陷，纖維蛋白原明顯減低，抗凝血酶物質增加，嚴重肝功能損壞，新生兒出血癥，胃腸道紊亂致使維生素K吸收不良，阻塞性黃疸。
WHO規定用Warfarin（法華林）時INR值允許范圍為：
手術前處理：（非髖離手術1.5～2.5，髖部外科手術2.0～3.0）；預防靜脈血栓；2.0～3.0；活動性靜脈血栓；（反復發生的靜脈血栓，肺栓塞及其預防2.0～4.0）；預防動脈血栓和栓塞包括心臟瓣膜（機械瓣）的手術：3～4.5。
臨床上用注射維生素K前后測定凝血酶原時間用來做肝源性黃疸和阻塞性黃疸的鑒別。