紅細胞檢測和隱血試驗在尿液檢測中的影響因素

 摘要 目的：對比四種不同方法檢測尿液紅細胞和血紅蛋白的結果。以分析其影響因素和臨床價值。方法：采用UF-100尿沉渣分析儀、尿沉渣檢查尿紅細胞、干化學法、膠體金單克隆抗體法隱血試驗對167份尿液聯合檢查，對四種檢測結果進行對比。結果：以鏡檢法為標準UF一100尿沉渣分析法紅細胞準確度為86．2％，干化學法紅細胞準確度為85．O％。尿隱血試驗中，干化學敏感性為300 g／L，單克隆抗體隱血為200 g／L，干化學與膠體金單克隆抗體隱血指標(金標準)對比，干化學隱血法的敏感度為80．7％，特異性為84．3％。結論：四種檢測方法的聯合應用更能提高尿液檢查的質量．對疾病的診斷、治療及病程中動態觀察有重要的參考價值。

尿液隱血和紅細胞檢測是診斷泌尿系疾病，特別是腎小球性與非腎小球血尿的重要指標之一。由于尿液成分的復雜性，會造成檢驗結果出現假陰或假陽結果，造成漏檢或誤診 。為了解檢測結果的可靠性、準確性和影響因素，我們用UF-100尿沉渣分析儀、尿沉渣顯微鏡檢查尿紅細胞、干化學法、單克隆抗體法隱血試驗對167份尿液聯合檢查。

1 資料與方法

1．1 尿液標本的來源    所有尿液標本均來自病房患者晨尿，要求病房患者用專用尿杯留取中段尿，即時送檢，以確保尿液新鮮。

1．2 與試劑     Clinitek 200尿干化學分析儀及尿十聯試條(美國Bayer公司)；萬華牌消康保便血膠體金檢測試紙即OB試紙(美國萬華普曼公司)：尿液干化學物(美國BIO-RAD公司)；UF-IO0全自動、原廠配套試劑、質控物及校準物

(日本Sysmex公司)；Olympus普通光學顯微鏡(日本Olympus公司)。

1. 3 試驗方法    用一次性尿杯收集患者潔凈中段晨尿，1 h內送檢。于UF-100尿分析儀、尿干化學儀上檢測及進行單克隆隱血試驗，并對標本進行非染色尿沉渣鏡檢，2 h內完成。鏡檢操作如下：于刻度離心管加入混勻后新鮮尿液10 mL、1 500 r／min離心5 min，棄上層清液，留0．2 mL沉渣。輕搖使尿沉渣有形成分混勻后取0．02 mL于載玻片上鏡檢 。用不同質量濃度的人血紅蛋白液分別為150、200、300、2 000 ug／L作干化學與膠體金單克隆抗體隱血試驗進行靈敏度實驗。

1．4 結果判斷    UF-100尿分析儀及尿沉渣鏡檢結果均以紅細胞>3／HP為陽性，尿干化學儀檢測結果以“微量及以上”為陽性。單克隆抗體法尿隱血陽性以試帶中出現兩條明顯紅線為陽性判定標準。

1．5 統計學處理    用SPSS 11．0軟件進行統計學處理，資料采用X 2檢驗，P<0．05為差異具有統計學意義。

2 結果

167例住院患者的尿液用四種方法同時檢查．結果干化學法隱血試驗陽性為60例．陽性率為35．9％；膠體金單克隆抗體隱血試驗陽性為52例。陽性率為31．1％，沉渣鏡檢紅細胞陽性為45例，陽性率為26．9％。UF-100尿分析儀檢測紅細胞陽性為48例，陽性率為28．7％。

以鏡檢法為標準，UF-100尿分析儀檢測紅細胞準確度為86．2％，干化學法檢測紅細胞準確度為85．0％(表1)。尿沉渣鏡檢與uF-100尿分析儀檢測結果比較，X 2 =72．31，P<0．05；尿沉渣鏡檢與尿干化學儀檢測結果比較，X 2 =75．05，P<0．05；尿沉渣鏡檢與單克隆抗體法檢測結果比較，X 2=56．67，P <0．05。

尿隱血試驗中，干化學法敏感性試驗為300 ug／L，膠體金單克隆抗體隱血法為200 ug／L，尿干化學隱血指標與膠體金單克隆抗體隱血指標(金標準)同時檢測，檢測結果嚴格對比，干化學隱血法的靈敏度為80．7％，特異性84．3％(表2)。

3 討論

尿液干化學分析儀檢測隱血屬于定性半定量方法，其原理是尿液中紅細胞內的血紅蛋白或其破壞釋放的血紅蛋白均含有亞鐵血紅素，具有過氧化物酶樣活性，在氧化茴香素或過氧化氫烯枯存在條件下，催化鄰甲聯苯胺脫氫，出現顏色變化。膠體金

單克隆抗體隱血法原理是應用膠體金顯色原理和層析技術，利用單克隆抗人血紅蛋白抗體特異檢測人血紅蛋白。膠體金試紙可測出樣本中的微量血紅蛋白(200 g／L)，不與其他類血紅蛋白結合，不受其他食物、藥物及過氧化物影響，也不受鐵劑干

擾，所以不會出現假陽性，只有當尿標本中含有人血紅蛋白時，隱血試驗才呈陽性，故具有較高的靈敏度和準確度，且特異性強，并能檢測已破碎的紅細胞，大大提高了隱血檢測的陽性率。167份尿液檢查中干化學法隱血反應陽性率為35．9％，膠體金單克隆抗體隱血陽性率為31．1％，由以上實驗看出干化學法檢測隱血陽性率高于單克隆抗體法，但干化學法檢測敏感度比單克隆抗體法低，干化學與膠體金單克隆抗體隱血指標(金標準)對比，干化學法檢測隱血陽性6O例中有18例存在假陽性。其假陽性原因有：(1)游離血紅蛋白、肌紅蛋白具有過氧化物酶活性物質。(2)尿道感染，一些的過氧化物，如真菌。(3)化學污染，如次氯酸鹽等。(4)部分患者尿中含不穩定酶，可使試劑塊顏色改變。(5)試條過期、污染、保存不當、操作不正確等 。假陰性原因有：尿中含大量維生素C、尿液濃縮、尿蛋白含量高等。目前由于常用的尿干化學檢測隱血的方法存在假陽性與假陰性的問題，對尿液中無完整的紅細胞，而存在游離血紅蛋白的尿樣本，采用單克隆抗體法檢測尿隱血，能彌補尿干化學檢測隱血的方法的不足。故在實際工作中，尤其是對尿隱血為弱陽性標本，應通過單克隆隱血法測定尿隱血來進一步確定檢驗結果，以免出現不必要的漏診和誤診。

UF-100尿沉渣分析儀顯著提高了紅細胞計數的準確度與精密度。然而它在臨床應用過程中出現了一個嚴重的缺陷：干擾因素太多、敏感性高、特異性差。其假陽性原因有：當尿液中出現結晶、精子、細菌、真菌或其他粒子時都會干擾它的檢測和對紅細胞的識別。因為UF-100分析儀是根據細胞的前向散射光強度和熒光強度來分析的，而結晶、精子、細菌和真菌的大小與紅細胞相近，特別是平均熒光強度值較高時，紅細胞假陽性的可能性大，如果同時紅細胞熒光脈沖分布寬度也較大時．可基本確信紅細胞假陽性。UF-100分析儀紅細胞計數結果陽性有48例，顯微鏡檢測陰性結果中，假陽性13例．其中結晶6例，精子1例，真菌4例，細菌2例，假陽性率占27．1％。而尿液中的紅細胞溶解，卻又會造成假陰性，UF-100就無法計數，只有通過膠體金單克隆抗體法隱血試驗才能檢出。通過對20例干化學陽性而UF-100計數結果陰性的標本顯微鏡檢查，鏡下全部未見有紅細胞，再通過膠體金單克隆抗體法做隱血試驗，結果18例陽性，2例陰性，假陰性率高達90％ 這些標本如果沒有經過顯微鏡檢查或膠體金單克隆抗體法隱血試驗驗證，就會向臨床醫生提供錯誤信息。

目前沒有一種尿檢方法是完美無缺的。由于四種方法檢測原理、影響因素不同，檢測結果存在一定差異。UF-100全自動尿沉渣分析儀和鏡檢只能對尿中完整細胞有形成分進行檢測，對破損的細胞不能檢測、而干化學和膠體金單克隆抗體隱血法卻

能檢測到溶解的紅細胞，不會對溶解的紅細胞漏檢，但干化學法檢測隱血假陽性多，這是尿液分析儀與鏡檢法符合率相差較大的主要原因。由于尿干化學分析儀測定結果假陽性較多，必須經過顯微鏡檢查或膠體金單克隆抗體法試驗驗證，以保證報告

的可靠性，四種檢測方法的聯合應用可以取長補短，更能提高尿液檢查的質量和保證報告的可靠性，對疾病的診斷、治療及病程中動態觀察有重要的參考價值。