什么是內標法？

內標法在色譜分析中是一種常用的定量分析法。它尤其廣泛的應用于高壓液相色譜中。這種方法可以抵消儀器和過程帶來的誤差。 將一定量的某種純物質，作為內標物加入到已知重量的樣品中，進行色譜分析，內標物在色譜圖上得到分離的峰。根據已知含量的內標物的峰面積和樣品的峰面積，計算組分的百分含量。只要主要組分能被分離和能被檢測就可使用這個方法，一些次要組分成為重疊峰或者對檢測器無響應就可以允許存在。不過，內標物的選擇要符合以下要求：（1）內標物的峰與組分峰能完全分離（2）內標物峰在色譜圖上出現的位置，最好在欲定量組分峰的鄰近位置。如果樣品中有幾個組分需要定量，并且他們的k’之差別較大，這時就需要用幾個內標物來作定量測定。（3）內標物的性質和濃度盡量與預測定峰的接近。（4）內標物是樣品中不存在的，與樣品各組分、柱填料和移動相不發生化學反應。 根據組分百分含量與其色譜峰面積成正比的關系進行計算：式中，Pi、fi、Ai和Ps、fs、As分別為組分i和內標物的含量百分比、相對校正因子和峰面積。將兩式相除，得： 假設我們以內標物的相對校正因子作為這些組分相對校正因子的標準，即所有的組分的校正因子都是相對于內標物的，即fs = 1其中是已知的，將組分i的標準物與內標物配成溶液接近的二元混合物，進行色譜分離，將測得峰面積以及已知的濃度代入（8）式中，求得fi，最后根據（7）式計算分析樣品中組分i的百分含量。 有（8）式我們還可以看出，對于一定的樣品組分和內標物組成的溶液，當內標物在混合溶液中的含量相同時，樣品組分在溶液中的含量與組分峰面積和內標物峰面積之比成正比。因此，我們可以將樣品組分標準物與內標物之成數分內標物含量相等的、樣品組分含量不同的溶液。將他們分別進樣后，得到一系列相應的Ai和As。每組Ai/As值對相應的樣品組分含量Pi作圖，得帶一條外推可通過坐標原點的直線。 同時將樣品和內標物配制成與上述組分標準物有相同內標物含量的溶液，在相同的操作條件進樣后，從色譜圖上得到此溶液中組分i與內標物s的峰面積比Ai/As。將其與上述方法繪制的標準校正曲線作對照，從與此Ai/As相對應的點即可求得組分i在樣品中的含量。 內標法特別適用于只需要比較準確的測定樣品中一兩個峰的情況。結果小心地測定校正因子或繪制標準校正曲線，這個方法的精密度最好可達0.1%。 這個方法的不足之處是增加了一個內標物，是分離的難度增大，對于組成復雜的樣品，分離更為困難。另外，每次測定都需要準確的稱量，操作麻煩，難以適應快速的中間控制分析。 內標法亦可用峰高進行計算，但與外標法一樣，要求操作條件十分穩定。