摘 要：目的 對醫學實驗室電化學發光檢驗項目的測量不確定度進行評價。方法 確定并簡化羅氏公司Modular E170全自動電化學發光免疫分析儀的測量不確定度來源，采用不確定度A 類及B 類評價方法，量化各不確定度分量，確定合成不確定度與測量不確定度。結果 測量不確定度的來源主要包括批內重復性不確定度（UW）、批間重復性不確定度（UB）、校準品不確定度（UCal）、方法偏倚不確定度（UBias）；UW、UB、UCal、UBias與測量不確定度的相關系數分別為0.94、0.92、0.95、1.00，所占比重分別9％、9％、22％、60％。在相同測量條件下，各檢測項目高低濃度水平標本測量不確定度差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 正確評價測量不確定度，分析不同因素對測量結果的影響程度，對臨床檢驗工作的質量保證、結果解釋、滿足醫學實驗室認可要求及不同實驗室間結果互認都有重要意義。
根據《ISO15189 醫學實驗室質量和能力認可準則》的要求，適用且可能時，實驗室應確定檢驗結果的不確定度。目前，多數實驗室采用室內質控和室間質評結果計算批內、批間及偏倚的測量不確定度。隨著檢驗醫學領域參考測量體系的建立，部分重要臨床檢驗項目已可由廠商提供校準品溯源與賦值校準品的不確定度。本研究參考歐洲診斷試劑廠家協會（EDMA）發布的醫學實驗室測量不確定度評估方法，對電化學發光檢驗項目的測量不確定進行了評價。
１ 材料與方法
１．１ 儀器與試劑Modular E170全自動電化學發光免疫分析儀（簡稱E170分析儀）及配套AFP、CEA、CA125、CA153、CA199、PSA、f-PSA、FER、β-HCG、IgE、TSH、T3、T4、FT3、FT4、INS、C肽、E2、FSH、LH、PRL、PROG、TESTO檢測試劑和個項目校準品Cal Set。質控品Tumor Marker Plus Control（批號54501/2）、Immunoassay Plus Control（批號40231/2）購自美國BIO-RAD公司。
１．２ 方法
１．２．１ 測量不確定度評價程序 分析E170分析儀測量過程，確定并簡化測量不確定度的來源。利用實驗室方法性能驗證中的批內精密度和日常室內質控數據統計的批間精密度作為不確定度A 類評價；利用衛生部臨檢中心室間質評結果和廠家提供的校準品不確定度數據作為不確定度B 類評價。采用以上方法量化各不確定度分量，根據各不確定度分量方差和的正平方根計算合成不確定度。
１．２．２ 不確定度A 類評價 （１）批內重復性不確定度：以兩個不同濃度水平質控品為標本，依據EP15-A2進行批內精密度評價。計算兩個濃度水平檢測結果的批內標準差（SW）及批內重復性引起的不確定度
（２）批間重復性不確定度：分別計算近1個月內兩個不同濃度水平質控品檢測結果的批間標準差（SB）及由批間重復性引起的不確定度UB ＝
。
１．２．３ 不確定度B 類評價 （１）方法偏倚不確定度：統計2009～2010年本實驗室參加衛生部臨檢中心室間質評的結果。根據比對結果，統計每項結果與靶值的差值（dn），計算差值的平均值（dm）、標準差（Sdr）及由方法偏倚引起的不確定度
（２）校準品不確定度：引用廠家提供的校準品不確定度，由校準溯源導致的不確定度以Ucal表示。
１．２．４ 合成不確定度和測量不確定度的確定 合成不確定度＝
；測量不確定度＝合成不確定度×包含因子k，k＝２。
１．３ 統計學處理 采用SPSS 12.0 統計學軟件分析數據；各項目不同濃度水平標本的測量不確定度比較采用單因素方差分析，顯著性檢驗水準為α＝0.05。
２ 結 果
２．１ UW 、UB、UCal 和UBics是構成測量不確定度的主要來源，即測量不確定度分量，各檢測項目的測量不確定度分量及合成不確定度見表1。在相同測量條件下，各項目高低濃度水平對應的測量不確定度差異有統計學意義（P＜0.05）。
２．２ 各測量不確定度分量與測量不確定度的相關性及所占比重見表2，4個測量不確定度分量與測量不確定度均具有相關性，其中UBias與測量不確定度相關性最強，所占比重最大。
３ 討 論
測量不確定度是與測量結果相關聯的參數，用于表征合理賦予被測量之值的分散性，是定量說明測量結果質量的參數，也是保證檢測質量的重要因素。ISO15189要求對檢驗結果的不確定度進行評價時，應考慮所有重要的不確定度分量。不確定度來源包括采樣、樣品制備、樣品的選擇、校準品、參考物質、輸入量、設備、環境條件、樣品狀態和操作人員變更等。
電化學發光免疫分析系統是由試劑、儀器和校準品組成的密不可分的完整系統。本研究中在評價電化學發光檢驗項目測量不確度時引入了4 個重要的分量，即UW 、UB、UCal 和UBias。
可溯源的校準品可定量評估由校準引入的系統誤差。目前，校準實驗室已經使用并在逐步完善測量不確定度的評價，但醫學實驗室目前尚未普遍接受以不確定度來表述測量質量，這與誤差理論已使用多年，多數實驗室工作人員以經驗評價測量誤差，且無法獲得用于評價臨床實驗室測量不確定度的關鍵因素校準品的不確定度有關。隨著歐洲主要國家開始執行體外診斷試劑法令，多數國外廠家和少部分國內廠家已能提供校準品的不確定度。陳文祥等也指出不確定度可用的信息包括廠家提供的校準物定值溯源性和不確定度報告、室內質控和室間質評數據、方法驗證實驗結果、文獻報道的分析前變異及干擾或特異性實驗結果等。本研究中，UCal 與測量不確定度的相關系數及其所占比重分別為0.95和22％，與其他3個分量比較，相關性和比重都不能忽略，說明應使用可溯源的校準品以盡量減少儀器檢測的系統誤差，降低測量不確定度。
批內和批間重復性數據可用于評價不確定度。臨床檢驗室內質控工作為評價不確定度帶來很大的方便。不確定度是指在統計控制狀態下賦予被測量之值的分散性，而室內質控工作要達到的目的正是使整個臨床標本測量工作處于統計控制狀態下，因而室內質控所得出的分散性可代表臨床標本在統計控制狀態下的分散性。使用室內質控數據評價不確定度，不僅考慮了儀器在測量中的不確定度，而且也包括了測量相關的其他因素（如樣品狀態、環境條件、操作人員變更等）。
本研究中結果顯示，UB、UW 、UCal、UBias 均是醫學實驗室檢測項目測量不確定度的要素。其中，UBias 與測量不確定度的相關性最強，所占比重最大，說明醫學實驗室應嚴格做好室內質控工作，并定期參加室質評活動，有效監測實驗室檢測質量，為實驗室制定質量保證計劃提供有效依據。
不確定度大小和待測樣品濃度相關。相同測量條件下，高低濃度樣品測量不確定度差異顯著。測量不確定度是與某一特定報告數值相關聯的參數，不同測量數值的不確定度是不同的，因此醫學實驗室應在給定濃度下評估項目的測量不確定度。
一般認為，測量不確定度是經典誤差理論發展的產物。誤差是測量結果和真值之差，由于真值往往是不可知的，故誤差僅為理想的概念，不可能被確切地知道。但不確定度能夠以一個區間的形式表示，當對一個分析過程和所規定樣品類型進行評價時，可適用于其所描述的所有測量值。相對于誤差而言，不確定度在用詞、意義、評價原理等方面更具合理性，應用范圍也更加廣泛。
綜上所述，正確評價醫學實驗室測量不確定，分析不同因素對測量結果的影響程度，對臨床檢驗工作的質量保證、結果解釋、滿足醫學實驗室認可要求及不同實驗室間結果互認都有重要意義。