通常,此法中的mtt
濃度為5mg/ml。因此,可以稱取mtt
0.5克,溶于100
ml的磷酸緩沖液(pbs)或無酚紅的培養基中,用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌,放4℃
避光保存即可。在配制和保存的過程中,容器最好用鋁箔紙包住。
需要注意的是,mtt法只能用來檢測細胞相對數和相對活力,但不能測定細胞絕對數。在用酶標儀檢測結果的時候,為了保證實驗結果的線性,mtt
吸光度最好在0-0.7
范圍內。
mtt一般最好現用現配,過濾后4℃避光保存兩周內有效,或配制成5mg/ml保存在-20度長期保存,避免反復凍融,最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把mtt粉分裝在ep管里,用的時候現配,直接往培養板中加,沒必要一下子配那么多,尤其當mtt變為灰綠色時就絕對不能再用了。
mtt有致癌性,用的時候小心,有條件最好帶那種透明的簿膜手套.配成的mtt需要無菌,mtt對菌很敏感;往96孔板加時不避光也沒有關系,畢竟時間較短,或者你不放心的時候可以把操作臺上的照明燈關掉.