梅毒的實驗室檢測方法（二）

2、梅毒螺旋體抗原血清學試驗：常用的主要有梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(TPPA)，梅毒螺旋體血球凝集試驗(TPHA)，梅毒酶聯免疫吸附試驗（ELISA），化學發光免疫分析法（CLIA），還有如梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)，熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS），梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）。

TPHA：所用抗原為將梅毒螺旋體Nichols株經超聲破碎后得到的可溶性抗原成分，用其致敏紅細胞。同時用Reiter株制成吸收劑稀釋血清，可將血清中的非特異性抗體吸收掉，以加強測定的特異性。

TPPA:測定原理基本上與TPHA類同，所不同的是TPPA所用的凝集顆粒為明膠，而非TPHA中的紅細胞。用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒與血清中的抗梅毒螺旋體抗體結合，產生可見的凝集反應，具有較高的敏感性和特異，是目前公認的梅毒抗原血清學試驗的“金標準”，常用于新方法、新試劑的參照標準。

TPPA試驗原理示意圖

ELISA:采用雙抗原夾心ELISA法檢測梅毒螺旋體特異性IgM和IgG抗體。將高純度的特異抗原(通常含相對分子質量為5500、17000、44500、47000的蛋白質)包被于微孔反應板(條),待測血清中如存在抗TP抗體，即可與之結合。再加人酶標記的高純度抗原，在固相上形成抗原抗體復合物與酶標記物結合，待加人酶底物/色原(過氧化服ITMB)液時即產生呈色反應，用酶聯檢測儀判定試驗陽性反應,呈色強度與抗體水平成正比。

本法可用于大樣本血清檢測,適用于自動化檢測系統,是目前梅毒篩查的較好方法。

ELISA試驗原理示意圖

近年出現采用基因工程重組表達的特異性梅毒螺旋體抗原包被固相板，使試驗更具有敏感性和特異性，具有簡單、快速和高通量的優點，應是梅毒血清學診斷試驗的首選方法，但在工作中常出現假陽性的問題,而大多數是由于弱陽性反應引起的。

CLIA：原來與ELISA相同，是在ELISA技術基礎上發展而來，以多種梅毒螺旋體特異性蛋白(TpN15、TpN17和TpN47)為固相抗原，并用辣根過氧化物酶(HRP)標記同種蛋白為標記抗原，與患者血清中的梅毒螺旋體抗體形成雙抗原夾心復合物，經洗滌，加入底物(發光劑)，根據發光強度(RLU)來判斷患者血清中是否含有梅毒螺旋體特異性抗體。近年來推出的全自動化學發光法，具有簡便、準確、經濟的特點，且敏感性、特異性與其他常用方法結果相符合。

是放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）與酶聯免疫分析（Enzymeimmunoassay，EIA）的結合，采用雙抗夾心法的原理，使用化學發光底物取代傳統的顯色底物，增加了檢測的靈敏度。

CLIA試驗原理示意圖

RT：一般常用的多是膠體金免疫層析(GICA)，是20世紀90年代初建立的一種簡易快速穩定的免疫學檢測技術，是使用膠體金作為標記物的一種固相膜免疫測定方法。采用純化重組基因的梅毒抗原包被膜條測試區，加入待測血清后，血清中的抗體與膜條上金標記抗人IgG或抗IgM反應，然后通過毛細管效應層折至測試區與包被的特異抗原結合，在測試區出現紫紅色條帶為陽性。該法簡便、快速，不需要特殊的儀器，適合于單人份操作，也適用于較緊急的場合。

有全血和血清、血漿法

全血法：

血清、血漿法：

FTA-ABS：方法是將梅毒螺旋體Nichols株抗原直接涂在載玻片上，然后將密螺旋體無毒株（Reiter株）制成吸收劑加至待測血清標本中反應30分鐘，以去除同屬抗原的交叉反應。再將吸收后的血清加到玻片的抗原膜上，37℃溫育30分鐘，用PBS緩沖液沖洗晾干，再加熒光素標記的抗人IgG，37℃溫育后沖洗，晾干，最后在熒光顯微鏡下觀察結果。

本試驗由于吸收試劑的使用，提高了測定的特異性，可達92%。由于使用的是梅毒螺旋體Nichols株抗原，密螺旋體各種抗原分子均存在，提高了試驗的敏感性，對一期梅毒的敏感80%，二期為99-100%，三期為95-100%。

FTA-ABS的結果觀察

WB：將梅毒螺旋體Nichols株菌體細胞破碎，使用凝膠電泳將梅毒螺旋體各種抗原成分轉印到膜條上作為固相，膜條與待測血清和酶標抗體孵育,底物顯色后,當血清中存在梅毒特異性抗體時,則在印跡膜上相應的特異性多肽抗原位置出現顯色條帶。

WB的試驗結果：

四、兩種血清學檢測方法的比較

非梅毒螺旋體抗原血清試驗優點：1、非梅毒螺旋體血清試驗陽性的患者往往是梅毒現癥感染者，臨床上即可開展治療。2、非梅毒螺旋體血清試驗可以作為療效觀察的指標。3、此類方法價格低廉，操作簡便。

缺點：1、特異性：由于在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、結締組織病、靜脈***者以及孕婦中均可出現反應素，所以此類試驗有時會出現假陽性反應。2、敏感性：約1%-2%的二期梅毒病人出現前帶反應現象導致結果假陰性。此外，由于反應素出現的時間晚于特異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒或經過治療后反應素可能轉陰，這類試驗對隱性梅毒也不敏感，因此，用此類試驗進行梅毒篩查時，存在相當數量的漏檢。

特異性梅毒螺旋體抗原血清試驗優點：具有較高的敏感性和特異性。

缺點:成本較高，操作相對復雜，不能作為療效觀察指標，不能絕對排除假陽性。

正是由于各自有著不同的優缺點，所以對于梅毒的診斷治療，一般都同時用兩種方法進行檢測。

梅毒血清學試驗結果的臨床意義