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  • 發布時間:2012-11-07 00:00 原文鏈接: ABIVeriti――真正意義上的溫度梯度PCR儀

      ABI作為PCR儀中最值得信賴的品牌,引領了PCR儀一系列創新性設計革命。Veriti系出名門,秉承了一貫的可靠性,并是真正意義上的梯度多重控溫(六合一)梯度PCR儀。

      溫度梯度PCR儀進展

      溫度梯度PCR儀最先由Eppendorf公司在1998年研發成功推向市場(Mastercycler Gradient),此后Biometra、MJR、Bio-rad、Thermo等公司相繼推出各種型號的溫度梯度PCR儀,所采用的技術相差無幾。那究竟什么是溫度梯度PCR儀呢?可以把一次PCR擴增實驗設置成一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度)的實驗,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。設置梯度的主要原因是因為被擴增的不同DNA片段,其最適退火溫度不同,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR反應就可以篩選出表達量最高的最適退火溫度,優化實驗,進行有效的擴增。梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,在節約成本的同時也節約了時間。梯度PCR儀在不設置梯度的情況下也可以做普通PCR擴增,可以說是一臺多功能的PCR儀。

      常規梯度PCR儀原理

      通常梯度PCR儀的熱反應模塊由分別控溫的2組或3組Peltier元件組成,研究者可以設置跨樣品基座的退火溫度范圍,在2組或3組Peltier元件上設置不同的溫度,通過熱傳導在樣品基座上形成溫度梯度。如圖1圖2分別為兩種不同的在用梯度PCR儀的加熱模塊。

      

      

      圖1 模塊:2塊 圖2 模塊:6塊3組

      由于PCR儀是精確控制溫度的儀器,PCR反應要求樣品基座有最好的溫度均一性,樣品基座的溫度均一性與持續時間高度相關,時間越長,溫度均一性越好,溫度梯度越難以形成。因此,溫度均一性要求與溫度梯度形成互相矛盾。對于普通溫度梯度PCR儀來說,樣品基座上由于熱傳導的速率和邊緣效應,本身會形成孔間溫度差異。例如,兩組Peltier設定溫度分別為55℃和56℃,孔間溫度差異為±0.5℃,這樣,在同一組Peltier上兩孔之間的最大溫差為1℃,如圖3所示。由于樣品基座溫度均一性為±0.5℃,所以設置溫度梯度間隔在1℃以內意義不大,超過2.5℃則溫度跨度太大,最好在1.5~2.5℃范圍。并且,普通溫度梯度PCR儀是通過熱擴散(被動)形成溫度梯度,不能準確設置和測定樣品基座每一列的溫度,退火溫度時間設置長短對梯度溫度的影響很大。因此,受技術限制,每次溫度梯度實驗也只有幾個孔的數據有意義。

      

      圖3 普通梯度PCR儀控溫模擬示意圖

      創新的Veriti多重控溫模塊

      只有具有準確控制樣品基座不同區域溫度(主動)形成溫度梯度的技術才是功能完善的溫度梯度PCR儀,才能真正起到優化PCR反應條件的作用,才能將優化 PCR反應條件普遍應用,我們ABI Veriti溫度梯度PCR儀就完美的做到了這一點。它采用VeriFlex?反應模塊,使用6塊獨立的半導體加熱模塊,超越溫度梯度功能,真正可以優化 PCR,控制每個模塊設置的溫度, VeriFlex?反應模塊的6塊獨立半導體又可以看作是6個可同時獨立設置溫度的小模塊,相鄰兩個模塊的最大設置溫差5℃,整個模塊的溫度跨度為 25℃,使得在一次PCR中能夠使用6個不同引物(分別在6個Blocks上)。

      

      

      A B

      

      圖4 Veriti溫度梯度PCR儀示意圖。A:Veriti外觀;B:加熱模塊及實驗成果;C:VeriFlex加熱模塊溫度梯度與常規PCR儀溫度梯度對比示意圖

      Veriti 溫度梯度PCR儀在使用中獲得線性梯度,而不是非線性的“S”型曲線,可以達到溫度控制的精確性,可實現PCR優化過程中精確的溫度控制。Veriti溫度梯度PCR儀采用6.5英寸VGA觸摸式顯示屏進行控制,簡化繁瑣的編程步驟,使PCR實驗變得不再是漫長的等待,更有效的節省了實驗時間,同時得到更優異的實驗結果,是真正意義上的溫度梯度PCR儀。

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