一種新穎的細胞自噬研究實驗技術

　　美國國立衛生研究院，英國牛津大學的研究人員研發出了一種高通量，能定量分析原代人類細胞自噬的新技術。這種技術首次在已知與細胞自噬有關的疾病中檢測到了自噬發生的水平，這將有助于進一步分析與藥物療效密切關聯的細胞自噬，相關成果公布在Autophagy雜志上。

　　細胞自噬是一個進化上保守的過程, 它包括將細胞質成分包裹在一個稱為自噬體的雙層膜結構，以及運送至溶酶體進行降解的過程。自噬可通過降解長壽命的蛋白、蛋白聚合物以及受損細胞器來調控細胞的穩態。它還可以通過限制炎癥、清除有毒的未折疊蛋白，除去生成活性氧簇(可損害DNA)的受損線粒體來抑制腫瘤形成，因此失去這些保護性措施將促使癌癥發生。

　　但是傳統的細胞自噬檢測技術并不適用于臨床樣品，這也阻止了細胞自噬研究的進一步發展。在這篇文章中，研究人員利用Amnis公司(現屬于默克密理博)的ImageStream 成像分析流式細胞儀，提出了一種高通量，能定量分析原代人類細胞自噬的新技術。

　　研究人員在敲除了基本細胞自噬基因的多個細胞系，以及原代細胞中進行了驗證，表明這種方法能有效提供細胞群的統計數據，還可以獲得單個細胞的圖像，從而提供細胞自噬完整信息。

　　通過這種方法，研究人員發現T細胞比B細胞的自噬活性更強，而且健康樣品中主要衰老細胞 CD8+ T細胞隨著DNA損傷的增加，而自噬活性下降，這也許解釋了衰老免疫系統的一些相關特征，以及為什么這一系統會隨著年齡增大而衰老。

　　研究人員認為，這項技術首次在已知與細胞自噬有關的疾病中檢測到了自噬的水平，這將有助于進一步分析細胞自噬與藥物療效的密切關聯。

　　ImageStream 是一種全新的流失細胞技術，這種儀器能將流式細胞檢測與熒光顯微成像結合于一身，既能提供細胞群的統計數據，又可以獲得單個細胞的圖像，從而提供細胞形態學、細胞結構和亞細胞信號分布的信息。

　　目前ImageStream 已推出了最新版本：ImageStreamX Mark II，這是第三代ImageStream成像流式細胞儀，具有獨特的細胞分析能力。與原先的ImageStream相比，Mark II產生了每個流動細胞的多幅高分辨率圖像，包括明視場、暗視場和最多10個熒光標記，且靈敏度超過傳統的流式細胞儀。與ImageStreamX相比，Mark II的流程更簡單、靈活性更高，且針對稀有細胞應用進行了優化。ImageStreamX Mark II能實時捕獲每個流動細胞最多12幅高分辨率圖像，檢測速率可達5000細胞/秒，并具有更強熒光靈敏度。ImageStreamX Mark II的這些功能可以對細胞形態、熒光探針的強度和定位進行檢測，進而為科學家提供廣泛的圖像分析應用，包括細胞間相互作用、吞噬、凋亡和自噬、核易位、形態變化等。