流動相選擇
1）由強到弱：一般先用90％的乙腈（或甲醇）／水（或緩沖溶液）進行試驗，這樣可以很快地得到分離結果，然后根據出峰情況調整有機溶劑（乙腈或甲醇）的比例。
2）三倍規則：每減少10％的有機溶劑（甲醇或乙腈）的量，保留因子約增加３倍，此為三倍規則。這是一個聰明而又省力的辦法。調整的過程中，注意觀察各個峰的分離情況。
3）粗調轉微調：當分離達到一定程度，應將有機溶劑10％的改變量調整為5％，并據此規則逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。
