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  • 發布時間:2021-10-27 13:57 原文鏈接: 核酸純化怎樣保存核酸

    純化后的核酸,最后多使用水或者低濃度緩沖液溶解;其中 RNA 以水為主,DNA 則多以弱堿性的 Tris 或者 TE 溶解。經典的 DNA 溶解方法多提倡使用 TE 溶解,認為 EDTA 可以減少 DNA 被可能殘留下來的 DNase 降解的風險;如果操作過程控制得當,DNase 的殘留幾乎是可以忽略的,完全可以直接使用 Tris 或者水 (pH 接近 7) 溶解 DNA。基本上,核酸在保存中的穩定性,與溫度成反比,與濃度成正比。如果溫度合適,保存中核酸發生降解或者消失,首要原因是酶殘留導致的酶解,第二個原因則是保存核酸溶液的 pH 值不合適導致的水解 (RNA 在弱酸性更穩定,而 DNA 在弱堿性更合適)。還有一個不為人重視的,就是 EP 管對核酸的影響。首先一定要堅信一點,那就是核酸一定會與裝它的容器的接觸面發生反應,達到某種均衡。EP 管的材質,首先可能吸附核酸,其次還可以誘導核酸的結構發生某些變化,如變性。在核酸的濃度比較高時,這個現象可能觀察不到;當核酸濃度很低時,則比較明顯了。如抽提的質粒電泳的構型越來越多,除了原來的三種帶型外,還可能出現 denatured cc 、multimeric forms of cc 等等帶型。在低濃度的核酸中加入 Geletin,Glycogen,BSA 可以穩定核酸,雖然已經為實驗所證明,但許多實驗人員并沒有將該建議當回事。

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