①前增菌 在非抑制性肉湯中進行前增菌,促使沙門氏菌開始生長。所用方法隨樣品而異,應按 AOAC 967.26A(常規方法)或現行版的細菌學分析手冊進行。但下列樣品除外。
a.生的或嚴重污染的樣品 以無菌操作稱取25g 樣品放入滅菌的打碎杯內,加入225mL 滅菌的乳糖肉湯,高速(約20000r/min)打碎2min,蓋嚴杯蓋并于室溫下靜置60min。搖勻,用試紙測定 pH 值,如必要時用滅菌的1mol/LNaOH 或 HCl 調節 pH 值為6.8±0.2。在測定最終 pH 值前,蓋嚴杯蓋并混勻。以無菌操作,將每杯中的內容物移入滅菌的帶螺旋蓋的500mL 廣口瓶中。旋松瓶蓋1/4圈,于35℃ 培養24h±2h。
b.經加工的食品樣品 將前增菌肉湯于35℃培養18~24h。
②選擇性增菌 分別轉種1mL 經前增菌的培養液于亞硒酸鹽肉湯,需將亞硒酸鹽肉湯預熱至42℃,并于42.0℃±0.5℃水浴中培養6~8h;生的或嚴重污染食品的選擇性增菌必須培養18~24h。
③后增菌 從培養箱中取出選擇性肉湯,用手或渦旋混合器混勻。從四硫磺酸鹽管中移取1.0mL轉種于預熱在42.0℃±0.5℃水浴中的 MN 肉湯的管中。從亞硒酸鹽胱氨酸肉湯管中移取1.0mL 轉種于另一支預熱的 N 肉湯管中。除生的或嚴重污染的樣品外,所有食品均應于42.0℃±0.5℃水浴中培養 MN 肉湯14~18h,并于42.0℃±0.5℃(四硫磺酸鹽肉湯)或35℃(亞硒酸鹽胱氨酸肉湯)將選擇性增菌肉湯繼續培養14~18h。對于生的或嚴重污染的樣品,以它們各自的培養溫度,將選擇性增菌肉湯繼續培養6h。
④用于 EIA 分析的樣品制備——從培養箱中取出 MN 肉湯管,用手或渦旋混合器將其混勻。從每一 MN 肉湯管中移取0.5mL混合于一清潔的帶螺旋帽的試管中,在沸水浴或在流動蒸汽中加熱20min。于2~8℃ 貯存③剩余的 MN、四硫磺酸鹽和亞硒酸鹽胱氨酸肉湯管,以便對任何陽性樣品培養物進行確證。EIA 分析前,將加熱的 MN 肉湯冷卻至25~37℃。