分光光度法測定食品中甜蜜素

1)測定原理

在硫酸介質中環己基氨基磺酸鈉與亞硝酸鈉反應生成環己醇亞硝酸酯,與磺胺重氮化后再與鹽酸萘乙二胺偶合生成紅色染料,在550nm波長處測其吸光度,與標準比較定量。

2)試劑

①三氯甲烷。

②甲醇。

③透析劑:稱取0.5g二氯化汞和12.5g氯化鈉于燒杯中,以0.01mol/L鹽酸溶液定容至100mL。

④亞硝酸鈉溶液    10g/L。

⑤硫酸溶液:100g/L。

⑥尿素溶液    100g/L,臨用時新配或冰箱保存。

⑦鹽酸溶液    100g/L。

⑧磺胺溶液    10g/L。稱取1g磺胺溶于10%鹽酸溶液中,最后定容至100mL。

⑨鹽酸萘乙二胺溶液    1g/L。

⑩環己基氨基磺酸鈉溶液    精確稱取0.1000g環己基氨基磺酸鈉,加水溶解,最后定容至100mL。此溶液每毫升含環己基氨基磺酸鈉1mg。臨用時將環基氨基磺酸鈉標準溶液稀釋10倍,此液每毫升含環已基氨基磺酸鈉0.1mg。

3)儀器

分光光度計;漩渦混合器;離心機;透析紙。

4)試樣處理

同氣相色譜法。

5)操作方法

(1)提取

①液體試樣    稱取10.0g試樣于透析紙中,加10mL透析劑,將透析紙口扎緊,放入盛有100mL水的200mL廣口瓶內,加蓋透析20～24h得透析液。

②固體試樣    準確吸取10.0mL經處理后的試樣提取液于透析紙中。

(2)測定

①取兩支50mL帶塞比色管,分別加入10mL透析液和10mL標準液,于0～3℃冰浴中,加入1mL10g/L亞硝酸鈉溶液、1mL100g/L硫酸溶液,搖勻后放入冰水中不時搖動,放置1h。取出后加15mL三氯甲烷,置漩渦混合器上振動1min,靜置后吸去上層清液,再加15mL水,振動1min,靜置后吸去上層清液,加10mL100g/L尿素溶液、2mL100g/L鹽酸溶液,再振動5min,靜置后吸去上層清液,加15mL水,振動1min,靜置后吸去上層清液,分別準確吸出5mL三氯甲烷于2支25mL比色管中。另取一支25mL比色管加入5mL三氯甲烷作參比管。于各管中加入15mL甲醇、1mL10g/L磺胺,置冰水中15min,取出恢復常溫后加入1mL1g/L鹽酸萘乙二胺溶液,加甲醇至刻度,在15～30℃下放置20～30min,用1cm比色杯于波長550nm處測定吸光度,測得吸光度A及A_S。

②另取兩支50mL帶塞比色管,分別加入10mL水和10mL透析液,除不加10g/L亞硝酸鈉外,其他按①項進行,測得吸光度A_s0及A₀。

6)結果計算

式中    X——樣品中環已基氨基磺酸鈉的含量,g/kg;

           m——樣品質量,g;

           V——透析液用量,mL;

           c——標準管濃度,μg/mL;

           As——標準液吸光度;

           A_s0——水的吸光度;

           A——試料透析液吸光度;

           A——不加亞硝酸鈾的試料透析液吸光度。