(一)簡單定性中和試驗 本法主要用于檢出病料中的病毒，亦可進行初步鑒定或定型。先根據病毒易感性選定試驗動物(或雞胚、細胞培養)及接種途徑。將病料研磨，并稀釋成一定濃度(約100 LD50-1 000LD50或TCID50)。污染的病料需加抗生素(青霉素、鏈霉素各200-1 000單位)，或用細菌濾器過濾，與已知的抗血清(適當稀釋或不稀釋)等量混合，并用正常血清加稀釋病料作對照。混合后置37℃1h，分別接種實驗動物，每組至少3只。分別隔離飼喂，觀察發病和死亡情況。對照動物死亡，而中和組動物不死，即證實該病料中含有與該抗血清相應的病毒。本法亦可用于毒素(如毒毒素)的鑒定和分型。 (二)固定血清稀釋病毒法 本法多將病毒作10倍遞增稀釋，分置2列試管，第一列加正常血清(對照組)，第二列加待檢血清(試驗組)。混合后，置37℃作用1h，將各管混合液分別接種選定的試驗動物，每一稀釋度用3-5只動物。接種后，逐日觀察，并記錄其死亡數，觀察結束后，計算LD50和中和指數(表7-1、表7-2)，本法適用于大量檢樣的檢測。 本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體，對病毒而言，通常中和指數大于50者判為陽性，10-49為可疑，小于10為陰性。 (三)固定病毒稀釋血清法 本法用以測定抗病毒血清的中和價，將待檢血清2倍遞增稀釋，加等量已知毒價的病毒液(與血清混合后，每一接種劑量含病毒100LD50)，搖勻后，置37℃作用1h，接種實驗動物。 注：[1] 接種劑量0.1ml，含病毒100LD50; [2] 系指與病毒混合后的稀釋度; [3] 分母為接種數，分子為保護數; [4] PD50為半數保護，其計算法同LD50的計算。 (四)空斑減少法 在細胞培養上進行病毒中和試驗，近年來多采用空斑減少法。先將病毒稀釋成適當濃度，使每0.2ml含80個-100個PFU(空斑形成單位)，與不同稀釋度的待檢血清等量混合，置37℃作用1h-2h，分別測定PFU，使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價。見表7-4。 表7-4 空斑減少法中和試驗示例 注：[1] 血清用4倍遞增稀釋; [2] 空斑減少50%的血清稀釋度，其計算法同LD50的計算。