血液在血紅蛋白轉化液中溶血后，除SHb外各種血紅蛋白均可被高鐵氰化鉀氧化高鐵血紅蛋白，再與CN-結合生成穩定的棕紅色氰化高鐵積壓紅蛋白。HICN最大吸收波峰在540nm，最小吸收谷為504nm.特定標準條件下，毫摩爾消光系數為44L.mmol-1.cm。因此根據標本的吸光度，即可得是血紅蛋白濃度。
在沒有符合WHO標準的分光光度計的條件下，亦可用HICN參考液制標準曲綞，或耱出換算常數，間接計算血紅蛋白濃度（g/l）。
