引物設計的引物設計原則

1、引物長度一般為15-30bp，常用的為18-27bp，但不能大于38bp；

2、引物GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；

3、引物所對應的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之間，Tm值曲線以選取72度附近為佳，5'到 3’的下降形狀也有利于引物與模板的結合；

4、引物之間：兩個引物之間不應有多于4個的互補或同源堿基，不然會形成引物二聚體，尤應避免3’端的互補重疊。