DNA在復制的時候，在DNA解旋酶的作用下，雙鏈首先解開，形成了復制叉，而復制叉的形成則是由多種蛋白質和酶參與的較復雜的復制過程
（1）單鏈DNA結合蛋白（single—stranded DNA binding protein,ssbDNA蛋白）
ssbDNA蛋白是較牢固結合在單鏈DNA上的蛋白質。原核生物ssbDNA蛋白和DNA結合時表現出協同效應：如果第一個ssbDNA蛋白結合到DNA上去能力為1，第二個的結合能力可高達103；真核生物細胞里的ssbDNA蛋白與單鏈DNA結合時則不表現上述效應。ssbDNA蛋白作用是保證解旋酶解開的單鏈在復制完成前能保持單鏈結構，以四聚體的形式存在于復制叉處，等待單鏈復制后才脫下來，重新循環。因此，ssbDNA蛋白僅保持單鏈的存在，是不起解旋作用。
（2）DNA解鏈酶（DNA helicase）
DNA解鏈酶可以通過水解ATP獲得能量以解開雙鏈DNA。這一種解鏈酶分解ATP的活性依賴于單鏈DNA的存在。若雙鏈DNA中有單鏈末端或切口，則DNA解鏈酶能首先結合在這一部分，然后逐步向雙鏈的方向移動。復制時，大部分DNA解旋酶沿滯后模板的5’—〉3’方向并隨著復制叉的前進而移動，只有個別解旋酶（Rep蛋白）是沿著3’—〉5’方向移動。因而推測Rep蛋白和特定DNA解鏈酶是分別在DNA的兩條母鏈上協同作用以解開雙鏈DNA。
（3）DNA解鏈過程
DNA在復制前不僅為雙螺旋而且處于超螺旋狀態，而超螺旋狀態的存在為解鏈前的必須結構狀態，參與解鏈的除解鏈酶外有一些特定蛋白質，比如大腸桿菌中的Dna蛋白等。一旦DNA局部雙鏈被解開，就必須有ssbDNA蛋白以穩定解開單鏈，保證此局部不會恢復為雙鏈。兩條單鏈DNA復制的引發過程是有所差異，可是不論是前導鏈還是后隨鏈，都需要一段RNA引物用于開始子鏈DNA合成。因此前導鏈和后隨鏈的差別在于前者從復制起始點開始按5’—3’持續的合成下去、不形成岡崎片段、后者則隨著復制叉的出現、不斷合成長約2—3kb的岡崎片段。