主要活性成分
L-2-氨基-4-甲基戊酸。按干燥品計算,含C6H13NO2不得少于98.5%。
性狀
白色結晶或結晶性粉末;無臭,味微苦。
在甲酸中易溶,在水中略溶,在乙醇或乙醚中極微溶解
比旋度
取本品,精密稱定,加6mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含40mg的溶液,依法測定(2010年版藥典二部附錄Ⅵ E),比旋度為+14.9°至+16.0° [2]
鑒別
(1)取本品與亮氨酸對照品各適量,分別加水溶解并稀釋制成每1ml中約含0.4mg的溶液,作為供試品溶液與對照品溶液。照其他氨基酸項下的色譜條件試驗,供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應與對照品溶液的主斑點相同。
(2)本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜(《藥品紅外光譜集》987圖)一致。
檢查
酸度 取本品0.50g,加水50ml,加熱使溶解,放冷至室溫,依法測定(2010年版藥典二部附錄Ⅵ H),pH值應為5.5～6.5。溶液的透光率 取本品0.50g,加水50ml,加熱使溶解,放冷至室溫,照紫外-可見分光光度法(2010年版藥典二部附錄Ⅳ A),在430nm的波長處測定透光率,不得低于98.0%。氯化物 取本品0.25g,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ A),與標準氯化鈉溶液5.0ml制成的對照液比較,不得更濃(0.02%)。硫酸鹽 取本品1.0g,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ B),與標準硫酸鉀溶液2.0ml制成的對照液比較,不得更濃(0.02%)。銨鹽 取本品0.10g,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ K),與標準氯化銨溶液2.0ml制成的對照液比較,不得更深(0.02%)。其他氨基酸 取本品適量,加水溶解并稀釋制成每1ml中約含20mg的溶液,作為供試品溶液;精密量取1ml,置200ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液;另取亮氨酸對照品與纈氨酸對照品各適量,置同一量瓶中,加水溶解并稀釋制成每1ml中各約含0.4mg的溶液,作為系統適用性試驗溶液。照薄層色譜法(2010年版藥典二部附錄Ⅴ B)試驗,吸取上述三種溶液各5μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正丁醇-水-冰醋酸(3:1:1)為展開劑,展開后,晾干,噴以茚三酮的丙酮溶液(1→50),在80℃加熱至斑點出現,立即檢視。對照溶液應顯一個清晰的斑點,系統適用性試驗溶液應顯兩個完全分離的斑點。供試品溶液如顯雜質斑點,其顏色與對照溶液的主斑點比較,不得更深(0.5%)。干燥失重 取本品,在105℃干燥3小時,減失重量不得過0.2%(2010年版藥典二部附錄Ⅷ L)。熾灼殘渣 取本品1.0g,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ N),遺留殘渣不得過0.1%。鐵鹽 取本品1.5g,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ G),與標準鐵溶液1.5ml制成的對照液比較,不得更深(0.001%)。重金屬 熾灼殘渣項下遺留的殘渣,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ H 第二法),含重金屬不得過百萬分之十。砷鹽 取本品2.0g,加水5ml,加硫酸1ml與亞硫酸10ml,在水浴上加熱至體積約剩2ml,加水5ml,滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性,加鹽酸5ml,加水使成28ml,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ J 第一法),應符合規定(0.0001%)。細菌內毒素 取本品,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅺ E),每1g亮氨酸中含內毒素的量應小于25EU(供注射用)
含量測定
取本品約0.1g,精密稱定,加無水甲酸1ml溶解后,加冰醋酸25ml,照電位滴定法(2010年版藥典二部附錄Ⅶ A),用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定,并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于13.12mg的C6H13NO2。
分析方法
方法名稱: 亮氨酸測定—電位滴定法
應用范圍: 本方法采用滴定法測定亮氨酸的含量。本方法適用于亮氨酸 。
方法原理: 供試品置錐形瓶中,加無水甲酸與冰醋酸溶解后,照電位滴定法,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定。讀出高氯酸滴定液使用量,計算亮氨酸的含量。
試劑:
1.水(新沸放置至室溫)
2.高氯酸滴定液(0.1mol/L)
3.結晶紫指示液
4. 無水甲酸
5 .冰醋酸
6. 基準鄰苯二甲酸氫鉀
儀器設備: 電位滴定儀
試樣制備:
①高氯酸滴定液(0.1mol/L)
配制:取無水冰醋酸(按含水量計算,每1g水加醋酐5.22mL)750mL,加入高氯酸(70%-72%)8.5mL,搖勻,在室溫下緩緩滴加醋酐23mL,邊加邊搖,加完后再振搖均勻,放冷,加無水冰醋酸適量使成1000mL,搖勻,放置24小時。若所測供試品易乙酰化,則須用水份測定法測定本頁的含水量,再用水和醋酐調節至本液的含水量為0.01%-0.2%。
標定:取在105℃干燥至恒重的基準鄰苯二甲酸氫鉀約0.16g,精密稱定,加無水冰醋酸20mL使溶解,加結晶紫指示液1滴,用本液緩緩滴定至藍色,并將滴定的結果用空白試驗校正。每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于20.42mg的鄰苯二甲酸氫鉀。根據本液的消耗量與鄰苯二甲酸氫鉀的取用量,算出本液的濃度,即可。
貯藏:置棕色玻璃瓶中,密閉保存。
②結晶紫指示液
取結晶紫0.5g,加冰醋酸100mL使溶解,即得。
操作步驟: 精密稱取供試品約0.1g,置錐形瓶中,加無水甲酸1mL溶解后,加冰醋酸25mL,照電位滴定法,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定,并將滴定結果用空白試驗校正。記錄消耗高氯酸滴定液的體積數(mL),每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于13.12mg的C6H13NO2。
注1:“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一,“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。