1、 慢病毒轉染前18-24小時,將貼壁細胞以1×105/孔鋪到24孔板中。使細胞在慢病毒轉染時的數量為2×105/孔左右。
2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鮮培養基替換原培養基,加入適量病毒懸液。37℃孵育。
3、(對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟)4小時后加入2ml新鮮培養基以稀釋polybrene。
4、繼續培養24小時,用新鮮培養基替換含有病毒的培養基。
5、繼續培養。如果慢病毒含有熒光蛋白,一般轉染48小時后可見明顯熒光表達,72小時后更加明顯。如需FACS檢測轉染效率,可在轉染后72-96小時進行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加藥篩選,可以在轉染3-4天后開始加藥。