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  • 發布時間:2022-04-06 19:01 原文鏈接: 關于DNA測序技術的測序凝膠板的制備

      一、玻璃板的處理

      銀染測序的玻璃板一定要非常清潔,一般先用溫水和去污劑洗滌,再用去離子水沖洗玻璃板,除去殘留的去污劑,最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遺留的去污劑微膜可能導致凝膠染色時背景偏高(棕色)。短玻璃板經粘合溶液處理可將凝膠化學交聯于玻璃板上。這一步對于在銀染操作過程中防止凝膠撕裂至關重要。

      二、短玻璃板的處理

      A. 在1ml 95%乙醇, 0.5%冰乙酸中加入5ml粘合硅烷(Bind Silane), 配成新鮮的粘合溶液。

      B. 用經浸透新配的粘合溶液浸透的吸水棉紙擦拭仔細清洗過并已經自然干燥的玻璃板, 整個板面都必須擦拭。

      C. 4-5分鐘后, 用95%乙醇單向擦玻璃板, 然后略用力沿垂直方向擦拭。重復三次這一清洗過程, 每次均須換用干凈的紙, 除去多余的粘合溶液。

      [注意]

      1. 在95%乙醇單向擦玻璃板時過度用力會帶走過多的粘合硅烷, 使凝膠不能很好地粘附。

      2. 準備長玻璃板之前要更換手套,防止粘染粘合硅烷。

      3、防止粘合溶液沾染在長玻璃板上是很重要的, 否則將導致凝膠撕裂。

      三、長玻璃板的處理

      A. 用浸透Sigmacote溶液的棉紙擦拭清洗過的長玻璃板。

      B. 5-10分鐘后用吸水棉紙擦拭玻璃板以除去多余的Sigmacote溶液。

      [注意] 1. 用過的凝膠可在水中浸泡后用剃須刀片或塑料刮刀刮去。玻璃板須用去污劑完全清洗。或者凝膠用10% NaOH浸泡后除去。為防止交叉污染, 用于清洗短玻璃板的工具必須與清洗長玻璃板的工具分開, 如果出現交叉污染, 以后制備的凝膠可能撕裂或變得松弛。

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